实验二检测生物组织中的糖类、脂肪和蛋白质（必修一P18）.docVIP

实验二 检测生物组织中的糖类、脂肪和蛋白质（必修一P18） 一．实验目的：尝试用化学试剂检测生物组织中糖类、脂肪和蛋白质 二．实验原理： 1．可溶性还原糖（如葡萄糖、果糖、麦芽糖）与斐林试剂发生作用，可生成砖红色的Cu 2O沉淀。如： 葡萄糖+ Cu ( OH ) 2 葡萄糖酸 + Cu 2O↓（砖红色）+ H 2O，即Cu(OH) 2被还原成Cu 2O，葡萄糖被氧化成葡萄糖酸。 2．脂肪可以被苏丹Ⅲ染液染成橘黄色（或被苏丹Ⅳ染液染成红色）。淀粉遇碘变蓝色。 3．蛋白质与双缩脲试剂发生作用，产生紫色反应。（蛋白质分子中含有很多肽键，在碱性NaOH溶液中能与双缩脲试剂中的Cu2+作用，产生紫色反应。） 三．实验材料 1．做可溶性还原性糖鉴定实验，应选含糖高，颜色为白色的植物组织，如苹果、梨。（因为组织的颜色较浅，易于观察。） 2．做脂肪的鉴定实验。应选富含脂肪的种子，以花生种子为最好，实验前一般要浸泡3~4小时（也可用蓖麻种子）。 3．做蛋白质的鉴定实验，可用富含蛋白质的黄豆或鸡蛋清。 四、实验试剂 斐林试剂（包括甲液：质量浓度为0.1g/ mL NaOH溶液和乙液：质量浓度为0.05g/ mL CuSO4溶液）、苏丹Ⅲ或苏丹Ⅳ染液、双缩脲试剂（包括A液：质量浓度为0.1g/ mL NaOH溶液和B液：质量浓度为0.01g/ mL CuSO4溶液）、体积分数为50%的酒精溶液，碘液、蒸馏水。 五、方法步骤： （一）可溶性糖的鉴定 操 作 方 法 注 意 问 题 解 释 1. 制备组织样液。 （去皮、切块、研磨、过滤） 苹果或梨组织液必须临时制备。 因苹果多酚氧化酶含量高，组织液很易被氧化成褐色，将产生的颜色掩盖。 2. 取1支试管，向试管内注入2mL组织样液。 3. 向试管内注入1mL新制的斐林试剂，振荡。 应将组成斐林试剂的甲液、乙液分别配制、储存，使用前才将甲、乙液等量混匀成斐林试剂； 斐林试剂很不稳定，甲、乙液混合保存时，生成的Cu(OH) 2在70~90℃下分解成黑色CuO和水； 4. 试管放在盛有50-650C温水的大烧杯中，加热约2分钟，观察到溶液颜色：浅蓝色 → 棕色 → 砖红色（沉淀） 最好用试管夹夹住试管上部，使试管底部不触及烧杯底部，试管口不朝向实验者。 防止试管内的溶液冲出试管，造成烫伤； （二）脂肪的鉴定 操 作 方 法 注 意 问 题 解 释 花生种子浸泡、制片 浸泡3~4小时 时间过短，不易切片，时间过长，组织较软，不易成形。切薄，便于观察。 在子叶薄片上滴2~3滴苏丹Ⅲ或苏丹Ⅳ染液，染色1分钟。 染色时间不宜过长。 苏丹Ⅲ→橘黄色 苏丹Ⅳ染液→红色 用吸水纸吸去薄片周围染液，用50%酒精洗去浮色，吸去酒精。滴上1滴蒸馏水，盖上盖玻片，制成临时装片。 不去浮色，会影响对橘黄色脂肪滴的观察。同时，酒精是脂溶性溶剂，可将脂肪颗粒溶解成油滴。 低倍镜下找薄片的最薄处，可看到有染成橘黄色或红色圆形小颗粒 装片不宜久放。 时间一长，油滴会溶解在乙醇中。 三、蛋白质的鉴定 操 作 方 法 注 意 问 题 解 释 制备组织样液。 （浸泡、去皮研磨、过滤。） 黄豆浸泡1至2天 容易研磨成浆，也可购新鲜豆浆以节约实验时间。 鉴定：加样液约2ml于试管中，加入双缩脲试剂A，摇匀；再加入双缩脲试剂B液3~4滴，摇匀，溶液变紫色。 A液和B液要分开配制，储存。鉴定时先加A液后加B液。 CuSO4溶液不能多加。 先加NaOH溶液，为Cu2+与蛋白质反应提供碱性的环境。A、B液同时加入，会导致Cu2+变成Cu(OH)2沉淀，而失效。否则CuSO4的蓝色会遮盖反应的真实颜色。 可用蛋清代替豆浆。 蛋清要先稀释。 若稀释不够，蛋清粘在试管壁，与双缩脲试剂反应后会粘固在试管内壁上，使反应不彻底，且试管也不易洗干净。 附：淀粉的检测和观察：取2ml待测样液，加2滴碘液，观察颜色变化。 碘液不要滴太多 以免影响颜色观察 练习： 思考1．阅读课本P18，完成下列表格： 还原性糖 淀粉 蛋白质 脂肪 试剂 现象 思考2．试以葡萄糖为例写出相应方程式： 思考3．蛋白质检测的反应机制是什么？ 思考4．做可溶性还原性糖鉴定实验应选择什么样的实验材料？为什么？ 思考5．做脂肪的