2型重组腺相关病毒介导增强型绿色荧光蛋白在大鼠骨髓间充质干细胞的表达.pdfVIP

维普资讯 336 NeuralInjuryandFunctionalReconstruction，November2007，Vo1．2，No．6 · 论 著 · 2型重组腺相关病毒介导增强型绿色荧光蛋 白 在大鼠骨髓问充质干细胞的表达* 胡琦，康慧聪 ，许峰 ，刘晓艳，王霞，吴婷 ，朱遂强# 华中科技大学同济医学院附属 同济医院神经内科，武汉 430030 【摘要】 目的：观察携带增强型绿色荧光蛋 白的2型重组腺相关病毒 (rAAV。一EGFP)转导骨髓 间充质干细胞 (MSCs)的效率、表达时间及对细胞增殖的影响。方法：体外培养出MSCs，经传代 5次、鉴定后分为 2组 ，rAAV 组中按感染复数 1O加入 0．1mlrAAV2一EGFP；PBS组中加入 0．1mlPBS，培养后再传代 5次。用流式细胞仪检 测 2组P5和PIO代细胞 EGFP转导率，同时绘制 2组PIO细胞生长曲线。结果：rAAV2组P5和PIO代MSCs转 导率分别为21．71 ±1．02 、20．34％-4-1．13％，差异无统计学意义 (P一0．862)。生长曲线显示 rAAV2组细胞生 长较 PBS组缓慢 。结论 ：rAAV。一EGFP转导 MSCs效率可 ，表达时间长 ，对细胞增殖稍有影响，标记后 的细胞可用 于观察干细胞在体 内的存活、迁徙及分化。 【关键词】 骨髓 间充质干细胞 ；2型重组腺相关病毒 ；转导 【中图分类号】 R741 【文献标识码】 A 【文章编号1 1001—117X(2007)06—0336—04 GreenFluorescentProteinExpression inRatBoneM arrow MesenchymalStem CellsM ediatedbyRecombinantAdeno- associatedVirusType2 HL，Qi ，KANG Hui—cong，XL，Feng，L儿 Xiao—yah，WANG Xia，WL，Ting，ZHUSui— qiang．DepartmentofNeurology，TongJiHospital，TongJiMedicalCollege，HuazhongUniversityofScience and Technology，Wuhan430030，China [Abstract] Objective：Toevaluatetransductionratesandexpressionofenhancedgreenfluorescentprotein (EGFP)inmesenchyma1stem cells(MSCs)mediatedbyrecombinantadeno-associatedvirus2(rAAV2)，andtoob— serveimpactsofthetransductiononcellproliferation．M ethods：MSCsweredissociated，subculturedandidentified bydetectingCD44，CD45，andCD90．Aftersubculturefor5times，thecellsweredividedinto2groups，onemixed with0．1mlrAAVz—EGFPwithatiterof10 ．andanotherincubatedwith0．1mlPBSascontro1．Afteranother5 passages，transductionratesofEGFP intheP5and PIO MSCsweredetected by flow cytometryand cellgrowth curvesweregenerated．Results：ThetransductionratesofEGFP in