鸡白细胞介素18基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达.pdfVIP

安徽农业大学学报，2009，36(4)：547-551 JournalofAnhuiAgriculturalUniversity 鸡 白细胞介素 18基 因的克隆及其在大肠杆菌中的表达 李新生 ，尹红征 ，陈红英 ，邵攀峰 ，王振亚 ，宋亚鹏 (1．河南农业大学牧医工程学院，郑州 450002；2．河南农业大学信息与管理科学学院，郑州450002 摘 要：通过RT—PCR技术直接从罗曼鸡脾脏提取的总RNA中扩增鸡 白细胞介素 18(ChlL一18)全基因，并克隆 和测序得到序列基因全长为597bp的ChlL一18。将 ChlL一18成熟蛋白编码区(510bp)定向插入到原核表达载体 pGEX-4T—l中谷胱甘肽转移酶(GST)基 因的下游，构建重组表达质粒pGEX—ChlL一18，转化大肠杆菌BL21(DE3)，在 IPTG诱导下可高效表达融合蛋 白(GST—ChIL—t8)。SDS—PAGE可检测到分子质量约为46kDa的GST—ChlL一18。 Westernblot证实GST—ChlL一18能与鸡 IL。l8单克隆抗体发生特异性反应。融合蛋 白GST—ChIL一18经谷胱苷肽 Seph— arose-4B亲和柱层析纯化后明显促进鸡T淋 巴细胞转化，表明所表达的ChlL一18具有一定的生物活性。 关键词：鸡 白细胞介素18；成熟蛋白；克隆；原核表达 中图分类号：$858．315．3 文献标识码：A 文章编号 ：1672—352X(2009)04-0547-05 Genecloningandmatureproteinexpressionofchicken interleukin-18 inEscherichiacoli LIXin．sheng，yINHong—zheng，CHENHong—ying， SHAOPan—feng ，WANG Zheng—ya ，SONG Ya．peng (1．CollegeofAnimalHusbandryandVeterinaryMedicine，HenanAgriculturalUniversity，Zhengzhou450002； 2．CollegeofInformationandManagementScience，HenanAgriculturalUnive／sity，Zhengzhou450002) Abstract：Chickeninterleukin．18(ChlL．18)genewasamplifiedfrom totalRNAextracteddirectionallyfrom Luomanchickensplenocytesbyreversetranscription-polymerasechainreaction (RT—PCR)．PCRproductwas clonedintopGEM—TEasyvectorandsequenced．Theresultshowedthatthenucleotidesequenceofchicken IL一18 genewas597bp，includingthestop codenandthesameasthepublishedchicken IL-18 cDNA sequenceby SchneiderK．A prokaryoticexpressionplasmidofchickenIL·18gene，pGEX—ChIL一18，wasobtainedbysubcloning theencodingregionofchickenIL一18maturepeptidegeneintopGEX-4T一1．TherecombinantchickenIL一18wasex— pressedefficientlyinpGEX—ChIL一18一transformedBL21(DE3)LysSinducedbyIPTG，theyieldaccountedfor 18．6％ofthetotalbacterialprotein．Theresultsshowed thatfusion protein GST-ChIL一18wasabout46kDaand couldreactwithmonoclonalantibodyforchickenIL-18