实验3红细胞渗透性试验和血浆的缓冲性质试验.docVIP

实验2 红细胞渗透性试验和血浆的缓冲性质试验 一、红细胞渗透性试验 【目的】 通过红细胞渗透性实验，观察红细胞在不同渗透压的盐水中发生的变化，进而了解细胞外渗透压的相对恒定对维持细胞正常形态与生理功能的重要性。 【原理】 生理状态下，哺乳动物红细胞的渗透压与血浆的渗透压相等，约相当于0.9%NaCl溶液的渗透压，因此，将红细胞悬浮于等渗的NaCl溶液中，其形态与体积可保持不变。若将红细胞悬浮于低渗的NaCl溶液中，则水分过多进入红细胞，使之膨胀甚至破裂，血红蛋白释出，程之为红细胞溶血。红细胞对低渗溶液具有不同的抵抗能力，即红细胞具有不同的脆性，故临床上用不同浓度的NaCl溶液来测定红细胞的渗透脆性。对低渗NaCl溶液抵抗力小，表示红细胞的渗透脆性大；对低渗NaCl溶液抵抗力大，表示红细胞的渗透性小。开始出现溶血时的NaCl溶液浓度，为红细胞的最小渗透抵抗力。正常人红细胞的最小渗透抵抗力为0.42%～0.46%NaCl溶液，最大渗透抵抗力为0.32%～0.34%NaCl溶液。刚成熟的红细胞渗透脆性小，而衰老的红细胞渗透脆性较大，遗传性球形红细胞增多症患者，红细胞渗透性增加。生理学上将能使悬浮于其中的红细胞保持正常体积和形状的溶液，成为等张溶液。等张溶液一定是等渗溶液，但等渗溶液不一定是等张溶液。 【器材与药品】 试管架、小试管、2ml注射器、滴管、棉签、1000U/ml肝素、1%NaCl溶液、蒸馏水、碘酒、75%乙醇、人或兔血等。 【步骤】 1、制备不同浓度的NaCl溶液 取试管12支，做好编号，依次排列在试管架上，按表3-7-1配备不同浓度的NaCl溶液。 2、人或兔血的制备 （1）先在试管内加入0.2ml1000U/ml肝素（抗凝剂），取人（或兔）血6，加入盛有抗凝剂的试管里，混匀备用。 （2）取人血的方法：先用碘酒、75%乙醇消毒皮肤后，再用灭菌干燥的注射器从肘正中静脉取血6ml。 表3-7-1 不同浓度NaCl溶液的制备 试管编号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 1%NaCl 1.70 1.60 1.50 1.40 1.30 1.20 1.10 1.00 0.90 0.80 0.70 0.60 蒸馏水 0.80 0.90 1.00 1.10 1.20 1.30 1.40 1.50 1.60 1.70 1.80 1.90 NaCl浓度（%） 0.68 0.64 0.60 0.56 0.52 0.48 0.44 0.40 0.36 0.32 0.28 0.24 （3）取兔血的方法： ①心脏采血：将兔仰卧固定，剪去左侧相当于心脏部位的皮毛，用碘酒和75%乙醇消毒皮肤，选择心脏跳动明显处作穿刺。一般由锁骨左边缘外3cm处刺入兔的第3肋间隙。穿刺时，最好用左手触诊心脏以作配合。当针头接近心脏时，就会感到心脏的搏动，血液自然进入注射器。如认为针头进入心脏但抽不出血液，可把针头稍微退出或进入一点。心脏采血经6～7d恢复后，可以重复进行。兔一次采血量可达20～25ml。 ②兔耳中央动脉采血：将兔置于固定箱内，用酒精棉球擦揉兔耳片刻，使其充血。在兔耳中央有一条纵行、较粗、颜色鲜红的中央动脉。用左手固定兔耳，右手持注射器。在中央动脉末端，沿动脉平行地向心脏方向刺入动脉，轻轻抽动针筒，即可见血液进入注射器。一次可采血约15ml（采血后应注意止血）。采血一般采用6号针头，不可太细。需要注意的是兔耳中央动脉易发生痉挛性收缩，因此，采血前必须使兔耳充血。当动脉扩张未发生痉挛性收缩前立即进行，抽血的时间过长，动脉血管会发生较长时间的收缩，采血难以进行。 3、红细胞悬液的制备 用滴管向每支试管中滴加人或兔血1滴，摇匀，静置半小时后观察各管的颜色、透明度有何差别。 按下列标准判断有无溶血、不完全溶血或完全溶血： （1）上层清液无色，管低为混浊红色，表明没有溶血。 （2）上层清液呈淡红色，管低为混浊红色，表明有部分红细胞破裂溶解，为不完全溶血。这代表红细胞的最小渗透抵抗力。 （3）管内液体完全变成透明的红色，管低无细胞沉积，为完全溶血。这代表红细胞的最大渗透抵抗力。 【注意事项】 （1）试管一定要编号，避免混淆。 （2）配备不同浓度的低渗溶液时，小试管应干燥。 （3）加抗凝血量一定要准确一致，只加一滴。 （4）混匀时，用手指堵住试管口，轻轻倾倒1～2次，减少机械振动，避免人为的溶血。 （5）抗凝剂最好用肝素，其他抗凝剂可改变溶液的渗透压。 （6）抽取静脉血时动作要缓慢，向试管滴加血液时要靠近液面轻轻滴入溶液中，避免人为造成红细胞破裂而出现假性溶血。 （7）观察结果应在光线明亮处，必要时吸取试管底部悬液1滴在显微镜下观察。 二、血浆的缓冲性质试验 【目的】 了解血浆对酸碱的缓冲能力和血