RNA干扰iNOS基因对舌鳞癌细胞增殖活性及VEGF表达抑制实验研究.pdfVIP

中山大学硕士论文 RNA二|二扰iNOS基因对舌鳞癌细胞增殖活性及VEGF表达抑制的实验研究 RNA干扰iNOS基因对舌鳞癌细胞增殖活性及 VEGF表达抑制的实验研究 专业：口腔颌面外科 研究生：杨岚 导师：陈伟良教授 摘要 cell 舌鳞状细胞癌(tonguesquamouscarcinoma，TSCC)是口腔颌面部最常见的 恶性肿瘤之一。手术、放疗、化疗是目前主要的治疗手段，但总的5年生存率仍 只有60％左右，患者的生存质量也不高。因此除现有的治疗方式外，针对造成肿 瘤细胞无限增殖的特性，在基因水平进行治疗，将不失为一种非常有前途的肿瘤 治疗策略。 一氧化氮(nitricoxide，NO)是生物体内一种小分子气体，一种结构简单的自 由基，具有氧化还原性。它在体内发挥着十分重要的生理功能，参与了调节生物 体的循环、神经、免疫等一系列生理、病理过程。大量的临床和实验研究表明， NO对肿瘤发生、发展、转移过程发挥着“双刃剑”的作用。NO在发挥抑瘤作 用的同时，还具有促进肿瘤生长、发展、侵袭、转移的作用。而NO最终对肿瘤 发挥何种作用，与肿瘤组织局部NO浓度、肿瘤类型、以及肿瘤细胞对NO的敏 感性等多种因素有关。近期的研究发现，NO与一些与肿瘤细胞凋亡相关因子相 互作用，抑制肿瘤细胞的凋亡，促进肿瘤细胞的增殖。更有研究发现，NO与肿 瘤的血管形成密切相关。 oxide 内源性NO是由一氧化氮合酶(nitric synthase，NOS)以L一精氨酸为底物 氧化合成的。因此了解NOS在体内的表达是衡量内源性NO的重要指标。生物 (iNOS)。其中iNOS作用缓慢而持久，其产生的NO量较多。大量的研究表明许 多肿瘤细胞中可见iNOS的表达。 新生血管的形成是肿瘤的生长和侵袭转移的基础。肿瘤组织必须不断的产生 中山大学邶i-I：论文 RNA干扰iNOS基因对舌鳞瑞细胞增殖活性及VEGF表达抑制的实验研究 新生血管，刁请E维持其继续生长。肿瘤血管生成受血管生成促进因子和血管生成 抑制因子的共同凋控。肿瘤的血管形成则表明二者之间的平衡状态被打破。血管 endothelial 内皮生长因子(vascular factor，VEGF)是肿瘤新生血管形成最重 growth 要的细胞因子，通过一系列作用促进肿瘤的发展。近期的研究发现：NO也是促 进肿瘤血管形成的细胞因子，并与VEGF相互作用，共l司促进肿瘤血管的生成。 许多研究都表明，iNOS和VEGF与肿瘤血管生成密切相关。 RNA， dsRNA)抑制细胞内源性基因表达的现象。它是动植物生物体内普遍存在的一种 现象，是生物体在进化上的种保守的基因组水平的免疫监控机制。自从1998 年Fire在对线虫的研究中偶然发现RNAi这一现象以来，RNA干扰技术做为一 种新的分子医学研究的手段，由于其高稳定性、高效率性、高特异性、可遗传性 和合成简便等特性，很快就成为众多学者进行反向遗传学研究的一种行之有效的 分子生物学工具之一。 在本课题的研究中，我们采用了RNA干扰技术，通过质粒表达载体的形式， 将iNOS基冈的特异性短发夹状RNAfshort hairpinRNA，shRNA))；-断转染入舌 mRNA水平和蛋白表达水平检测iNOS和VEGF基因的表达改变情况。以进一步 探讨iNOS基凶是否存在对Tca8113细胞中VEGF基冈的表达调控。 本研究分两个部分进行： 第一部分：RNA干扰iNOS基因对舌鳞癌细胞增殖活性影响 的实验研究 为研究NO和iNOS对肿瘤细胞凋亡和增殖活性的影响，本实验用脂质体 LIPOFECTAMrNE200