鼠抗沙眼衣原体Tarp蛋白单克隆抗体的制备及鉴定.pdfVIP

2010;30(10) 南方医科大学学报(JSouthMedUniv) 窑2219窑 鼠抗沙眼衣原体Tarp 蛋白单克隆抗体的制备及鉴 1 2 2 1 1 2 王 洁 袁张颖骞 袁钟光明 袁余 平 渊 中南大学基础医学院免疫学系袁湖南长沙 410078曰 美国德克萨斯大学圣 安东尼奥健康科学中心微生物学免疫学系袁圣安东尼奥 78229 USA冤 摘要院目的制备抗衣原体Tarp蛋白的单克隆抗体袁为探讨Tarp蛋白的生物学特性及功能提供实验工具遥 方法 克隆 表达沙眼衣原体血清型D重组Tarp融合蛋白袁并以其为免疫原免疫Balb/c小鼠袁取免疫小鼠的脾细胞和SP2/0骨髓瘤 细胞进行常规融合袁应用间接免疫荧光法筛选阳性克隆和有限稀释克隆化袁获得鼠抗沙眼衣原体血清型DTarp 蛋白单 克隆抗体的杂交瘤细胞株袁ELISA法鉴定单克隆抗体的抗Tarp特异性袁并应用间接免疫荧光法鉴定单克隆抗体的亚类 和衣原体种属特异性遥 结果成功克隆表达了重组GST-Tarp融合蛋白袁其相对分子质量约为 136000曰成功地建立了7 株稳定分泌抗Tarp蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株曰7 株单克隆抗体均特异性的识别Tarp 蛋白而不识别其他衣原体 性蛋白曰2 株单克隆抗体 渊R5B6.2 和R8G7.2冤 的免疫球蛋白亚类为IgG2a袁 其余 5 株单克隆抗体渊R4D5袁R2H1.2袁 R12B12袁R2H7 和R5G8.1冤的免疫球蛋白亚类均为IgG1曰7株单克隆抗体全部特异性识别衣原体血清型A尧D尧L2袁而不 识别MoPn尧6BC和AR39遥 结论 获得了特异性识别沙眼衣原体血清型DTarp蛋白的单克隆抗体袁为Tarp蛋白的结构 及生物学功能研究奠定了基础遥 关键词院沙眼衣原体曰Tarp曰单克隆抗体 中图分类号院R374 文献标志码院A 文章编号院1673-4254(2010)10-2219-05 Preparationandidentificationofmonoclonalantibodiesagainst Chlamydiatrachomatis Tarp protein 1 2 2 1 WANGJie ,ZHANGYing-qian,ZHONGGuang-ming,YUPing 1 2 DepartmentofI unology,BasicMedicalSchoolofCentralSouthUniversity,Changsha410078,China; DepartmentofMicrobiology andI unology,UniversityofTexasHealthScienceCenteratSanAntonio,SanAntonio,Texas78229,USA Abstract: Objective Toobtainmonoclonalantibodies (mAbs) against Chlamydiatrachomatis Tarpprotein. Methods ChlamydiatrachomatisserovarDrecombinantTarpfusionproteinwasclonedandexpressed. Balb/cmicewerei unized withrecombinantTarpfusionprotein, andthespleencellsofthei unizedmicewerefusedwithSP2/0mousemyeloma cells. ThehybridomacelllinessecretingmAbsagainstTarpproteinwerescreenedbyanindirecti unofluorescenceassay andsubclonedbylimitingdilut