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对新一代从头测序平台进行文库构建期间的 技 术 质量控制 说 明 Brian Matlock 和 Andrew F. Page | Thermo Scientific NanoDrop 产品，美国特拉华州威明顿市 简介 图1：新一代从头文库构建工作流程。红色菱形表示使用 新一代 (Next-Gen) 测序技术的出现使整个基因组学领域出现了革命性的变 革，它升级了测序流程，且可快速采集大量数据。目前有售的最常见的新一代 NanoDrop 2000c 时可证明有用的QC 步骤点。 测序平台包括 (1) Illumina® 生产的基因组分析仪系统、(2) Applied Biosystems 生产的 SOLiD™ 系统和 (3) Roche 生产的454 Life Sciences™ 系统。所有这三 种平台都需要构建随机裂解的核酸片段文库，具有从头测序的高特异性片段尺 寸范围。文库构建包括若干步骤，小心监控和跟踪过程十分重要，这样可以确 保大多数片段的结构正确且达到测序平台使用的最佳尺寸要求。大多数情况 下，文库构建是一个开销巨大的过程。因此，需要谨慎地将质量控制步骤贯穿 于整个文库构建过程中，以保证下游数据的质量。 新一代测序文库构建的质量验证 图1 列出了最常见的新一代平台的文库构建步骤。本说 明中，我们介绍了每个平台的工作流程，并突出显示了适 用点 （在图1 中以红色菱形表示 ），这些位置需要使用 Thermo Scientific NanoDrop 2000c 执行QC 步骤。 NanoDrop™ 2000c 分光光度计非常适用于进行新一代测 序文库构建的QC 验证。以下是NanoDrop 2000c 微量 分光光度计之所以非常适用于文库构建中QC 测试的三个 核酸的预裂解 特点： 在裂解步骤前，大多数文库构建工作流程都需要评估起始 (1) 测量所需样品量低至0.5 μL，可节约珍贵的样品。 物质的纯度，以确保样品中不含化学或蛋白污染物。通过 (2) 浓度测量非常准确。 确定吸光度比率 （A260/A280 和A260/A230）可实现上 述目的。比率的可接受标准通常会专门列于文库构建方 (3) 通过确定260/280 和260/230 比率可进行纯度评估并 案中。两种常用的核酸裂解方法是雾化法和自适应聚焦 显示污染物检测的全光谱数据。 声波法。这些专用技术可将DNA 片段随意裂解，需要在 重要考虑因素 严格控制的条件下进行操作。核酸类型、粘度和样品浓 A260 处获得的核酸浓度和基于荧光的方法所得的结果可 度等变量会影响上述裂解过程。尽可能不要改变这些变 能并不相同。这主要是由这些技术的固有差异造成的。