TNFR1-RANK嵌合体的构建及其在研究破骨细胞分化中的意义.DOCVIP

临床医学论文-TNFR1/RANK嵌合体的构建及其在研究破骨细胞分化中的意义 ?????????????????? 作者：许多荣， 罗绍凯 ， 童秀珍， 李娟? 【摘要】? 【目的】 构建肿瘤坏死因子受体1(TNFR1)膜外部分和核转录因子NF-κB受体激动剂（RANK）跨膜及膜内部分相结合的嵌合体，探讨其在破骨细胞(OC)分化中的意义。【方法】 克隆TNFR1/RANK嵌合体的cDNA，用plat E将其包装成逆转录病毒，通过感染将这种逆转录病毒转染到敲除TNFR1/R2基因的小鼠(TNFR1-/R2-)骨髓巨噬细胞(BMM)中；用TNFɑ刺激，分别观察OC的分化及骨的重吸收能力；用Western Blot方法证实TNFR1/RANK是通过NF-?资B、JNK、P38和ERK蛋白的磷酸化来调节OC的分化和功能。【结果】 在TNFɑ刺激下，BMM能分化成OC，而且分化出的OC能明显地导致骨质破坏。TNFɑ刺激BMM 5 min后磷酸化的NF-?资B、JNK、P38和ERK蛋白的表达明显增强。【结论】 TNFR1/RANK嵌合体具有完整的分子结构和生物功能，可作为研究RANK结构、功能及其信号途径的一个简便、有效的生物工具。 【关键词】? TNFR1/RANK; 嵌合体； 破骨细胞； 分化； 克隆 破骨细胞(osteoclast, OC)的分化受两个重要细胞因子的调节：单核/巨噬细