大鼠神经干细胞缺氧后的内源性促红细胞生成素表达规律.DOCVIP

临床医学论文-大鼠神经干细胞缺氧后的内源性促红细胞生成素表达规律 ?????????????作者：孙崇毅，姚猛，陈立民，刘庆鹏，吉光荣，王岩松 【关键词】? 缺氧 ???? 摘? 要：［目的］观察神经干细胞缺氧后的内源性促红细胞生成素（erythropoietin，EPO）表达规律，初步探讨缺氧预处理诱导神经保护作用的机制。［方法］测定大鼠神经干细胞缺氧培养4 h后不同时间的内源性EPO表达情况，以及预处理后不同时间，再次遭受致死剂量缺氧伤害后的EPO表达情况。［结果］缺氧时间为4 h，EPO蛋白在处理后即刻出现表达，4 h达高峰，8 h仍有部分表达。再次遭受致死剂量缺氧伤害后，与预处理4 h组相比，预处理24 h组细胞的EPO表达量明显增多。［结论］缺氧预处理能够提高神经干细胞应对伤害刺激时内源性EPO的表达，并降低再次缺氧时诱导EPO表达的阈值。 ??? 关键词：缺氧；? 预处理；? 干细胞；? 促红细胞生成素 ??? Abstract：［Objective］To investigate the endogenous erythropoietin expression of neural stem cells(NSCs) of rats after hypoxia.［Method］We used a rat NSCs culture model. EPO expression after 4 hours of hypoxia was studied. It was examined again following 12 hours of hypoxic lethal insult which was applied various times after hypoxic preconditioning. EPO expression was studied by western blotting.［Result］Following the preconditioning, expression of EPO increased immediately and reached a peak 4 hours later.It lasted till 8 hours later.While applied the lethal hypoxia,EPO expression of cells in preconditioning 24 hours group were was significantly increased than that in preconditioning 4 hours group.［Conclusion］The hypoxic preconditioning can lead an increased endogenous EPO expression and decrease the threshold of EPO expression against subsequent lethal stimulation during a certain period. ??? Key words：Hypoxia;? Preconditioning;? Stem cells;? Erythropoietin ?? 脊髓损伤是一种致残率很高的疾病。神经功能恢复多不理想。神经干细胞是一类具有自我更新能力和多种分化潜能的细胞，体外培养的神经干细胞移植治疗脊髓损伤成为近年来研究的热点之一。但细胞绝对数量和移植后局部微环境所限，使移植后细胞存活率不高［1］，限制了其神经功能修复作用，影响移植效果。最近研究表明，短时间缺氧处理可以有效提高各种组织应对伤害性刺激的能力，称之为缺氧预处理。本研究通过体外实验，探讨大鼠神经干细胞缺氧处理后内源性促红细胞生成素（erythropoietin，EPO）表达的规律，以期为神经干细胞缺氧预处理理论提供依据。 ??? 1? 材料与方法 ??? 11? 实验材料 ??? 111? 实验动物 ??? 孕13天的SD（SpragueDawley）大鼠，由哈医大二院动物中心提供。 ??? 112? 主要试剂? DMEM/ F12 (1∶1) （Gibco）；B27（Gibco）；碱性成纤维细胞生长因子(bFGF) 和表皮生长因子(EGF)（Pepro Tech）；AntiNestin兔抗多克隆抗体 (武汉博士德)；AntiEPO兔抗多克隆抗体 (武汉博士德)；SP羊抗兔二抗试剂盒及DAB显色盒(北京中杉)。 ??? 12? 实验方法 ??? 121? 原代神经干细胞的分离、培养? 取孕13 d的SD大鼠脱颈椎处死，无菌条件下取出胎鼠大脑半球，冰浴下剥离脑膜及血管，将脑组织尽量剪碎，滤液离心（90