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氨基酸的分离与鉴定-滤纸层析法 1.1、原理 1、纸层析原理 纸层析是以滤纸为惰性支持物的分配层析。 分配层析是利用不同物质在两个互不相溶的溶剂中分配情况（溶解度）的不同来分离混合物的一种技术。 层析时展层溶剂由有机溶剂组成，吸附在滤纸上的一层水分子为层析的固定相，与固定相不相混溶的有机溶剂为层析的流动相。 氨基酸的分离与鉴定-滤纸层析法 进行分离时由于被分离物质的组分在两相中的分布不同，随着流动相的移动，物质将在两相间进行连续的、动态的不断分配，从而造成不同组分移动的速度也不相同。 易溶于流动相中的组分移动快，在固定相中溶解度大的组分移动慢，于是得到分离。 氨基酸的分离与鉴定-滤纸层析法 物质分离后在滤纸上的位置可用比移值（Rf）来表示。 氨基酸的分离与鉴定-滤纸层析法 Rf值的主要决定因素是分配系数，不同物质的分配系数不同， Rf值也不同。 对某种特定的化合物，在特定的展层系统中，一定的温度下， Rf值是个常数。 但溶质和溶剂的性质、滤纸的性质、展层的温度等都对Rf值有影响。 此外，样品中的盐分、其它杂质以及点样过多等均会影响样品的有效分离。 氨基酸的分离与鉴定-滤纸层析法 用滤纸层析法分离氨基酸，是根据氨基酸样品的R基的化学结构或极性大小的不同， 将样品氨基酸溶解在适当的溶剂（水、缓冲液或有机溶剂）中，点样在滤纸的一端， 再选用适当的溶剂系统，通过毛细现象向另一端展层， 展层完毕后，用茚三酮作为显色剂，即可得到氨基酸样品的分离图谱。 氨基酸的分离与鉴定-滤纸层析法 2、茚三酮的显色原理 1.2、实验材料及试剂 实验材料：氨基酸及氨基酸的混合物。 实验试剂：试剂的配制及注意事项参P36。 氨基酸的分离与鉴定-滤纸层析法 1.3、实验步骤 操作过程及注意事项参P36。 1.4、实验结果及处理 认真观察实验现象，计算各氨基酸的Rf值，并对层析后氨基酸的显色情况进行分析。 * * 展层后斑点中心与原点之间的距离（X） Rf = 原点与溶剂前缘间的距离（Y） Y X 展层溶剂前沿 样品层析斑点 原点 氨基酸 + 茚三酮 紫红色复合物 570nm处具特征光吸收，可 据此定量测定各种氨基酸 * * *
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