人和动物戊型肝炎病毒血清学关系研究.pdf

——一 查堕查堂堕兰竺堡堡塞 人和动物戊型肝炎病毒血清学关系的研究 研究生丁福 指导老师孟继鸿 东南大学基础医学院病原生物学和免疫学系 中文摘要 戊型肝炎(HE)是-tO经粪口途径传播的急性传染病，严重危害人类健康。戊型肝炎病 目前可以将HEY分成I～Iv四个主要的基因型和多个亚型。多种非人灵长类动物对i|EV易感。 现已发现猪、啮齿类动物、牛、鸡、羊等可以感染HEV，动物在HE传播中可能起了重要 作用。深入研究fiEF在动物中的分布和传播对于HE诊断试剂的研制和人畜通用的HEY疫苗的 开发具有重要意义。 感性，探讨HEV抗体对不同重组抗原的反应性。主要研究内容和结果如下： 一、动物HEYORF：基因的克隆和表达 隆到pGEX-4T一2载体上，用双酶切和测序的方法进行鉴定；然后用重组质粒转化人肠杆菌 定和测序的结果说明目的基因正确连接到载体上，电泳结果证实p166Nz—S成功表达，而且所 表达的重组蛋白纯度高。 二、用多基因型的HEV重组蛋白建立双抗原夹心法ELISh(9S—ELISA) 的灵长类动物系列血清。结果显示3只实验动物感染ttEV之前和感染后短时间内HEV抗体阴 血清HEV抗体的检测。 RNA的检测 三、与人类生活关系密切的7种动物血清IIEV抗体和HeV 用血清学和PCR方法研究与人类生活关系密切的7种动物对HEV的易感性。结果发现存 猪、家犬和宠物狗血清标本中存在HEY抗体，警犬、山羊、鸡、鸭、鸽子和兔血清标本中末 RNA。表明用多基因型HEY重组蛋门 检测到HE7抗体；犬血清标本用RT—nPcR未扩增出HEV 建立的双抗原夹心法ELISA适用于多种动物血清标本HEY抗体的检测；猪和犬对HEV易感， 在HEV传播中可能起重要作用。 四、人和动物血清抗HEV抗体血清学关系的研究 将代表四种基因型的ttEV重组蛋白分别包被酶标板对实验感染HE、，的灵长类动物血清以 及部分fIEF抗体阳性的人和动物血清标本进行检测，分析人和动物血清tier抗体对不同㈨V 重组蛋白反应性的差异。结果显示，用与所感染IfEV病毒株相同基因型的重组蛋白检测效果 和动物血清标本用p166Nz-s和p166Chi检测效果较好， 有关，人HEv第1基因型重组蛋白会对部分感染HEV第Ⅳ基因型病毒株的个体所产生的抗体 缺乏反应性。 我们的研究结果表明， 用人和动物的多基因型和亚型的ttEV重组蛋白建立的检测HEV 中文摘要 体的检测；猪和犬对HEV易感，它们在HEV传播过程中可能起了重要作用；HEV抗体对不 同基因型HEV重组蛋白的反应性有差别。用与所感染的HEV病毒株属于同一个基因型的重 组蛋白作为检测抗原最佳；第1基因型重组蛋白对部分第Ⅳ基因型HEV病毒株感染所产生 的抗体缺乏反应性，单用第1基因型重组蛋白作为检测抗原容易造成漏诊；多基因型HEV 重组蛋白混合物是HEVELISA诊断检测抗原的最佳候选。 关键词戊型肝炎病毒；血清学；动物；多基因型重组蛋白；取抗原夹心法：克隆与表达 逆转录巢式PCR ——一—— 查堕查堂堡主兰垡笙壅 STUDYOF SEROLOGICAL RELATIONSHIP OFHEPATITISEVIRUS BETWEEN HUMAN AND ANIMAL an health in E(HE)is c