重组人巨细胞病毒（HCMV）优势表位嵌合抗原的构建表达以及捕获法检测IgM抗体.pdfVIP

维普资讯 遗 HEREDITAS(Beijing)2007年11月，29(11)：1351—1356 ISSN02539·772 WWW．chinagene．cn 研究报告 DOI：10．1360／yc-007-1351 重组人巨细胞病毒(HCMV)优势表位嵌合抗原的构建 表达以及捕获法检测 IgM抗体 孙鹏 ，孙兴宝 ，胡鹏 ，田晓红2邓波 ，夏 良雨 ，王宁燕 ，王红 ，李泓彦 ，何志强 1．深圳市第六人民医院，深圳 518054； 2．深圳市菲鹏生物股份有限公司，深圳 518054 摘要：通过计算机软件分析选择 巨细胞病毒优势抗原表位，用聚合酶链式反应(PCR)扩增优势表位基 因，构建 了巨细胞病毒多优势表位嵌合抗原表达载体 p4T-UL32．UL44．UL80a．UL83，转化宿主菌大肠杆菌 BL21(DE3)进 行表达，GST亲和层析法获得高纯度嵌合抗原，辣根过氧化物酶(HRP)标记嵌合抗原，并构建捕获法检测血清中 的抗HCMVIgM抗体。结果表达的优势表位嵌合抗原具有很好的抗原性，用其建立的捕获法检测确诊的3O份 阳性和 63份儿童阴性血，阳性检出率和阴性检出率都是 100％ 说明用嵌合抗原构建的捕获法检测血清中抗 HCMVIgM抗体具有更高的灵敏度和检出正确率，其检测水平已经达到国外的同类产 品水平。 关键词：人巨细胞病毒；优势表位嵌合抗原；捕获酶联免疫吸附法；IgM抗体 Captureanddetectionofhumancytomegalovirus(HCMV)IgM bya recombinantmulti—epitopechimericantigen SUN Peng，SUN Xing—Bao，HU Peng ，TIAN Xiao—Hong ，DENG Bo，XIA Liang—Yu ， WANGNing—Yan，WANGHong，LIHong—Yan，HEZhi—Qiang 1．TheSixthPeople’sHospitalofShenzhen，Shenzhen518054，China； 2．FaponBiotechlnc．，Shenzhen518054，China Abstract：Toestablishasensitiveand specificnatibody-captureenzyme-linked immunosorbentassay (AC-ELISA) methodtodetectserumIgM againsthumna cytomegalovirus(HCMV)byexpressingarecombinnatHCMV multie‘pitope cheimericantigenthroughgeneticengineering．Thedominna tepitopesofHCMV werenaalyzedna dselectde bycomputer softwareA recombinna tmulti．epitopechimericna tigenexpressionvectorincludingHCM V DNA wasconstructed，nad trnasformde intoE coliBL21(DE3)．Th enatigenWas abundnatlyexpressde，purifide，nadlabeledbyhorseradishperoxi- daseforsubsequentdevelopmentofhteAC-ELISA．Th irtyvalidatedpositiveserana dsixty-three validatde negativesera weresubmi ttde ofrIgM detcetionbythisrceombinnatna tigen．Th esensitivitynadspecificityofAC-ELISA wiht ourre‘ combinnatnatigenwereboht 100％．Th esensitivitynadspecificityofhtisAC-ELISA diagnostickitwiht hterceombinnat na tigenraecompraabletosimi lra foreigncom