hwtx-Ⅰ基因四价体表达载体构建及苏云金芽孢杆菌工程菌株研究.pdf

摘 要 苏云金芽抱杆菌((Bacillusthuringiensis,Bt)编码杀虫晶体蛋白 (InsecticidalCrystalProteins,ICPs)的cry基因中r‘y1类基因的启动子 是一类芽抱依赖型启动子，从芽抱形成T:期开始被激活。虎纹捕鸟蛛 毒素.I(Huwentoxin-I，简称 Hwtx-I)是虎纹捕鸟蛛分泌产生的 一类乙酞胆碱受体阻断剂，作用于神经肌肉的连接处，能阻断神经肌 肉的信号传导，其溶液构象为三对二硫键和三股反平行p折叠的抑制 剂肤氨酸结构模体。同时，其生物学活性表明也是一种N型C扩+离 子通道的阻断剂。本研究根据己知的Hwtx-I氨基酸序列，按照苏云 金芽抱杆菌偏爱密码，将氨基酸序列转换成核普酸序列，并将其基因 单价体分片段化学合成。将合成片段磷酸化并退火连接。同时设计一 段含有核酸内切酶助eI和XbaI位点的衔接子linker，利用这两种内 切酶酶切后的粘性末端互补这一特性，可将hwtx-I基因头尾串联形 成四价体。 带有Bt杀虫晶体蛋白基因cryltlc的质粒pUAl9经内切酶BsaB1 和Munl酶切后，去掉了 r‘y1Ac基因的ORF，只剩下cry114c基因的 上游启动子序列和下游