棕色固氮菌突变株DJ194和UW3中固氮酶蛋白的研究.pdf

摘要 用0．26moFL 柱用0．15．0．40moFL S．200柱、 NaCI缓冲液线形梯度洗脱，再经Sephaeryl 胶电泳胶上的主要蛋白带的相对迁移率比部分纯的OPAv2中分子量为32kDa的 条带略大些，在天然电泳中比OPAv2具有更高的迁移率。通过鉴定该制备物为 一种具有与OPAv2相似亚基组成的固氮酶Fe蛋白。它与OPAvl重组的乙炔还 nmol 原活性(6052 与OPAvl重组的乙炔还原活性，}r和N2(以在氩气和氮气下放氢的差值表示) 还原活性，均约为与OPAv2重组的活性的2．2倍。这些表明，该铁蛋白也许具 有一般固氮酶Av2所不具的结构和功能特性，使它表现出高还原活性、与先前 纯化得到的An／fZAv2不同的电泳迁移率和低的盐洗脱浓度。 S-200柱厌氧层析，从棕色固氮菌突 经DEAE-52，Q．Sepharose和Sephaery 变株UW3纯化得到CrFe蛋白制备物。其中～50％的蛋白具有与从野生型固氮菌 Avl的抗体发生免疫交 OP的MoFe蛋I刍(OPAvl)相似的亚基组成，并可与OP Avl 叉反应。该制备物还具有-40％的OPC2H2，H+和N2(以在氩气和氮气下放 氢的差值表示)还原活性，并具与OPAvl相似的电子对比率。金属分析表明，这 度则不相同。以上结果表明，CrFe蛋白也许是一种新的固氮酶组分I蛋白，除以 Cr代替Mo外，它的功能和包括金属原子簇在内的结构都可能与MoFe相似。 酶Fe蛋白(zln／fZAv202)；特性； Abstract ADEAEcolumn thecrudeextractof was absorbing DJl94developedby elutionwitll0．26moFLNaCl．Theinthe0．26moYLfractionwe此 stepwise protein On well a the column separatedbychromatographyQ-Sepharosedeveloped晰th NaCl further a ona gradient(O．15-_o．40moFL)and purifiedbychromatography S-200column．The were as Seph硼71 purifiedprotein designatedtentatively relative ofthemainband on SDSWas AnifZAv2供．Themobility gel ofAnifZAv2Qa somewhatthanthat higher ofoneofbandswiththemolecularof32kDafora weight Av2．The