T-2毒素诱导BALBC小鼠肝脏损伤差异表达蛋白质分析及其意义的初步研究.pptVIP

T-2毒素诱导BALB/C小鼠肝脏损伤差异表达蛋白质分析及其意义的初步研究 小组成员：郑丽金 施桂姣 张宁 1 课题的相关背景 T-2毒素是由Bamburg于1968年首次分离提纯并确认其化学结构，属A组单端孢霉烯族毒素。它是由镰刀菌产生的一种有毒代谢产物，其化学名称为4,15-二乙酰氧基-8-12,13-环氧单端孢霉-9-烯-3-醇 。 人畜误食污染的谷物后，可引起呕吐、腹泻、发烧等急性中毒症状，严重时损害造血系统，造成人畜死亡。1973年联合国粮农组织（FAO）和世界卫生组织（WHO）在日内瓦召开的联席会议上，把T-2毒素同黄曲霉素一样作为自然存在的最危险的食品污染源。 2 课题的研究意义 本研究通过蛋白质组学比较正常和染毒情况下小鼠肝脏蛋白质的差异表达情况，找到与病理改变有关的一系列疾病特异性差异蛋白质。 本实验以昆明鼠作为试验模型，不但大大降低了试验成本，而且为T-2毒素致病机理的研究指明方向，为完善由T-2毒素诱导的疾病发生信号通路提供新的信息。 3 实验的技术路线 4 结果分析与讨论 4.1 经灌胃十六周后小鼠状态比较 4.2 不同组小白鼠的肝脏比较 4.3 蛋白质标准曲线制作及不同组鼠肝蛋白浓度测定 4.4不同组小白鼠肝脏蛋白双向电泳分析 4.2 不同组小白鼠的肝脏比较 4.3 蛋白质标准曲线制作及不同组鼠肝蛋白浓度测定 4.4不同组小白鼠肝脏蛋白双向电泳分析 4.4.2三组鼠肝蛋白的2-DE图谱比较分析 5.实验展望 这能够为系统地揭示T-2毒素的致病机制铺平道路，为完善肝癌的发生通路提供有益信息，为疾病的诊断提供新的分子标记，为治疗和药物开发提供有效的靶标，具有重要的理论和实际指导意义。 致 谢 在汪世华老师的悉心指导和实验室师兄、师姐们的帮助下，本实验得以顺利完成，在此向他们表示衷心的感谢！ BEA Confidential. | * * * 指导老师：汪世华 教授 2 课题的研究意义 4 结果分析与讨论 3 实验的技术路线 提 纲 5 实验展望 1 课题的相关背景 T-2毒素是镰刀菌属真菌(主要是三线镰刀菌Fusarium trieinetum)的一种代谢产物，是隶属单端孢霉烯族霉素毒性最强的一种毒素，广泛存在于粮食作物及其半成品中。 T-2毒素配制 双向凝胶电泳 提取肝脏总蛋白 灌胃感染小鼠 PD Quest软件分析蛋白质 寻找差异蛋白 4.1 小鼠免疫 图5　不同组小白鼠的体形比较图 经灌胃十六周后小鼠状态比较 A B C C 图6　不同组小白鼠的肝脏比较图 A B 图7 Bradford法测蛋白质标准曲线 根据蛋白质标准曲线求出A、B、C三组小白鼠肝脏蛋白的浓度分别为2.4 g/L，5.2 g/L，6.3 g/L 。 图8　不同组小白鼠肝脏蛋白双向电泳图 4.4.1 双向电泳差异图谱 IEF（pH 3.5-10：pH 5-8=1：3） A 对照组 SDSB小剂量毒素组 图8　不同组小白鼠肝脏蛋白双向电泳图 C大剂量毒素组 图8　不同组小白鼠肝脏蛋白双向电泳图 图9 不同组小白鼠肝脏蛋白部分新增差异表达蛋白图谱放大比较图 A B C A B C 图7 不同组小白鼠肝脏蛋白含量降低差异表达蛋白图谱放大比较图 A B C 图7 不同组小白鼠肝脏蛋白含量降低差异表达蛋白图谱放大比较图 图10 不同组小白鼠肝脏蛋白部分消失差异表达蛋白图谱放大比较图 A B C A B C 图10 不同组小白鼠肝脏蛋白部分消失差异表达蛋白图谱放大比较图 将对照组、小剂量毒素组和大剂量毒素组小白鼠肝脏蛋白的2-DE图谱进行比较分析，三者的主要蛋白质组分非常相似，但也存在大小和有无的差异，本研究共发现9个差异蛋白质点。 下一步我们将采用质谱分析得到蛋白的氨基酸序列，用生物信息学软件分析预测其结构及功能。 *