左旋肉碱在人角膜和结膜上皮细胞转运机制研究.pdf

、j ，， ········…·······························1 ……………………………………4 胞的转运机制研究 ……………………………………9 ……………………………………1O ……………………………………14 ……………………………………16 ··········································22 ··········································23 ………………·：…………………·26 参考文献……………………………………………………………·26 综述左旋肉碱与疾病的发生……………………………………………32 致谢………………………………………………………………………………………………50 1 个人简历……………………………………………………………………5 中文摘要 左旋肉碱在人角膜和结膜上皮细胞的转运机制研究 摘 要 化、促进能量的产生、抗氧化与清除自由基等多种重要生理功能。机体可 少量合成左旋肉碱，大部分需要从饮食中获得。左旋肉碱的缺乏可导致疲 劳、肌无力、心肌病、低血糖症及意识混乱等。人眼泪中可以检测到游离 及乙酰化左旋肉碱存在。国外有研究表明，将左旋肉碱作为细胞的渗透压 保护剂添加于用于治疗干眼症的人工泪液中，可显著改善干眼症患者的临 床症状，但其作用机制未明，特别是泪液中的左旋肉碱是通过什么途径被 转运入细胞内尚未见报道d · cation 近年来大量研究表明，有机阳离子转运蛋白(Org；痂c tmsponer， oCTN)可转运肉碱进入细胞内，故又称肉碱／有机阳离子转运蛋白。oCTN 包括肾、脑、骨骼肌、心肌、乳腺以及胎盘组织中均有表达。虽然有功能 性研究表明，兔眼结膜组织中存在载体介导的有机阳离子转运系统，但左 旋肉碱在人角膜和结膜上皮细胞的转运机制尚不清楚。 本研究拟从基因水平和蛋白水平上观察OCTNs在人眼角膜和结膜上 皮细胞的表达与分布，并从功能上研究左旋肉碱在这些细胞的转运特性和 动力学参数，以揭示左旋肉碱在人眼表上皮细胞的转运机制，为临床应用 左旋肉碱治疗干眼症提供结构和功能基础，为进一步开发含左旋肉碱的人 工泪液提供理论依据。 方法：1在基因水平上采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT．PCR) comeal 1imbal epimelia， HCjE)细胞的表达，并通过测定目的产物的核苷酸序列来确认扩增反应的 特异性。 2在蛋白水平上采用WestemB10t、免疫细胞化学