FasFasL途径在PBDE47致SHSY5Y细胞凋亡中作用硕士论文.docVIP

华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 Fas/FasL途径在PBDE-47致SH-SY5Y细胞凋亡中的作用1 研究生：郭丽娟  导  师：王爱国 摘 要  教授  多溴联苯醚（polybrominared dipheny ethers, PBDEs）是一种重要的新型持久 性有机污染物（persistant organic pollutant, POPs），作为一类溴化阻燃剂被广泛 应用于电子设备、汽车、建筑装潢材料和纺织品等行业中。环境流行病学调查显 示，PBDEs广泛存在于各种环境介质中，并可以通过消化道、呼吸道和皮肤等途 径进入机体。在人体血液、乳汁和脂肪等组织中均可以检测出PBDEs的存在。体 内和体外实验发现，PBDEs对人体可造成多种健康危害，包括内分泌干扰作用、 肝脏毒性、生殖毒性、神经毒性和致癌作用等，作用的靶器官主要包括神经系统、 脂肪组织、甲状腺和生殖系统等。神经发育早期暴露PBDEs可损害感觉运动、学 习与记忆、自主行为发育等。 细胞凋亡是一种由基因调控的细胞自主性死亡过程，有助于选择性消除体内 生 理 性 和 病 理 性 异 常 细 胞 。 有 研 究 报 道 ， 2,2’,4,4’,5- 五 溴 联 苯 醚 （2,2’,4,4’,5-pentabromodiphenylether, BDE-99）可以诱导人脑星形细胞瘤细胞 凋 亡 。 本 实 验 室 前 期 的 研 究 已 经 发 现 ， 2,2’,4,4’- 四 溴 联 苯 醚 （ 2,2,4,4-tetrabromodiphenylether, PBDE-47）染毒可以引起人神经母细胞瘤 SH-SY5Y 细胞内 Ca2+浓度升高，并导致细胞凋亡，进一步研究发现，细胞凋亡 与 caspase12、caspase3、细胞色素 C 和 DAPK mRNA 表达水平升高有关，表明 PBDE-47 可能是通过三条典型的细胞凋亡通路—线粒体、内质网和死亡受体途 径诱导细胞凋亡的，但具体哪条途径是 PBDE-47 引起细胞凋亡的主要途径及其 作用机制尚不清楚，有待于进一步研究。  1  国家自然科学基金面上项目  3 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 Fas 和 FasL 介导的细胞凋亡依赖细胞膜表面表达有功能的 Fas 蛋白，通过 Fas-FasL 的结合作用而诱导激活后续的凋亡相关蛋白，特别是 Caspase3 蛋白酶， 最终导致凋亡。有研究证明，L-02 细胞经 H2O2 处理后，细胞内 Ca2+浓度升高并 导致细胞凋亡，伴随 Fas mRNA 和蛋白的表达增加，提示 H2O2 在诱导 Ca2+失衡 的同时可介导 Fas 基因的过表达，进而通过死亡受体途径诱导细胞凋亡。 因此，本研究拟通过培养SH-SY5Y细胞，在接触不同剂量PBDE-47的情况下， 观察PBDE-47对Fas、FasL、Caspase3、Caspase8 mRNA和蛋白表达水平的影响， 从而探讨Fas/FasL途径在PBDE-47致SH-SY5Y细胞凋亡中的作用。 本研究主要由以下二部分组成  第一部分  PBDE-47对SH-SY5Y细胞Fas、FasL、Caspase3、Caspase8 mRNA表达水平的影响  目的  探讨PBDE-47对SH-SY5Y细胞Fas、FasL、Caspase3、Caspase8 mRNA  表达的影响。 方法  用不同浓度PBDE-47（1, 5, 10 μmol/L）染毒SH-SY5Y细胞，  以二甲基亚砜（DMSO）为溶剂对照组，染毒24 h 后，用实时荧光定量PCR检  测细胞内Fas、FasL、Caspase3、Caspase8 mRNA的表达情况。 结果  5、10 μmol/L  剂量组Fas mRNA表达水平均明显高于对照组（P0.05）；10 μmol/L剂量组FasL mRNA表达水平明显高于对照组和低剂量组（P0.05）；5、10 μmol/L剂量组 Caspase3、Caspase8 mRNA表达水平均明显高于对照组和低剂量组（P0.05）。  结论  一定剂量的PBDE-47可导致SH-SY5Y细胞Fas、FasL、Caspase3、Caspase8  mRNA表达水平升高。  第二部分  PBDE-47对SH-SY5Y细胞Fas、FasL、Caspase3、Caspase8 蛋白表达水平的影响  目的  探讨 PBDE-47 对 SH-SY5Y 细胞 Fas、FasL、Caspase3、Caspase8 蛋  白表达的影响。 方法  体外培养的 SH-SY5Y 细胞暴露于不同浓度的 PBDE-47 4 华 中 科 技 大 学