耐低温、耐盐螺旋藻选育.pdf

中文摘要 本文利用超声波处理方法制备钝顶螺旋藻(Spirulinaplatensi0单细胞， 通过观察藻丝体的破碎程度以及藻丝段的平板再生情况，确定了超声波的最佳处 理时间：探索了出发藻株Spl对高盐度和低温的敏感性；分别采用驯化和诱变 (紫外线、微波和5％EMS与超声波的复合诱变)处理方法，对螺旋藻Spl进 行处理，通过低温驯化筛选到了l株耐低温品系，通过诱变筛选到了5株耐低 温突变株、1株耐高浓度NaCl突变株和l株耐低温海水螺旋藻突变株，并对 这8株耐性藻株的生化组分和生物学特性进行了研究，还利用RAPD分子标 记分析了它们的遗传多态性，并与其形态学特征进行了比较，为进一步的遗传学 研究提供了理论依据。研究主要结果如下： 1．超声波最佳处理时间的研究 螺旋藻Spl在经过超声波处理30s后，单细胞形成比例达68．33％，藻丝 段基本控制在3个细胞以内，且再生能力较好，适于进行诱变研究。 2．突变株生长特性和化学组分研究 与出发藻株Spl相比，螺旋诱变株不仅在低温、高盐度条件下能正常生长， 在自然条件下也较出发菌株生长速度快。 Sp5、Sp9、Sp7的多糖含量也有明显升高，比出发藻种提高了37．8％、29．4％、 41．6％tD 大量积累了某些氨基酸。 3．突变株形态及基因组DNA的RAPD分析 丝体的形态学特征进行了研究。结果表明，它们的形态具有一定差异。并利用若 干条随机引物对9株螺旋藻的基因组DNA进行RAPD扩增，从中筛选出10条 扩增多态性良好的引物。用SPSS软件对扩增结果进行聚类与亲缘关系分析，结 果表明：9个藻株在DNA水平上存在着较大的差异，它们之间的基因组DNA扩 增多态性片段同源性仅为33-56％，可将这9株供试菌株基因型划分为五大类， 这一结果与藻丝体显微形态特征的分类结果有较大出入。因此，仅依据形态特征 对螺旋藻进行分类是不合理的。当然，要对8株未知菌鉴定到种的水平，还需 运用其他分子生物学技术再次进行分析，并结合形态观察才可能给出准确的鉴 定。 关键词：螺旋藻；驯化；诱变；低温；耐盐；RAPD Abstraet Inthis effectsofultrasonicson strainwere thesis，the SpirulinaplatensisSpl time oftobreakdownthe studied，the filamentsof l strain optimumparameters Sp by ultrasonicswereobtained．The of l strainto andlow sensitivitySp highsalinity Was and temperatureinvestigated．Domestication methane usedtodealwithl strain．Onestrain 5％ethyl sulphonate(EMS)were Sp low Was obtaineddomesticatedinlow 5 bearingtemperature by temperature，and strains low strain salt andoneseawaterstrain bearingtemperature，one