一次注射同位素检测内源氨基酸损失量的方法学研究.pdfVIP

摘 要 本研究旨在完善静脉一次注射小剂量护H]Leu测定家禽内源氨基 酸损失量的方法。本方法是针对静脉连续灌注同位素标记动物法的不 口产， 足而提出的。 一次注射法的基本设想是，依据单代谢区理论、内源AA来源和 分布规律以及同位素示踪的原理，认为排泄物中内源Leu比放射性强 度((SR,)随血浆游离Leu比放射性强度((S凡)呈等比例变化。因此， 不同饲粮间SR,/S凡近似相等。据此，可由无氮饲粮(NFD)的SR,/S凡 之值估计实际含氮饲粮的SRQ值，进而推算内源Leu排泄量。 c本研究分三步进”于: (1)不同饲粮时排泄物中内源Leu与血浆游离Leu比放射性强度 之比相等的可能性证明。选择24只BW相近 ((1.5比左右，BW)的尼 克红蛋青鸡，随机分为4个处理，每个处理3个重复，每重复2只鸡。 除绝食组外，分别饲喂NFD饲粮以及分别以豆粕、棉粕为唯一氮源的 饲粮(CP为20%)。正式绝食或强饲后，立即静脉注射30uci[3H]Leu/kg WB(lml/kgBW)，分别于注射后5min,30min,4hr,24hr,36hr,48hr 翅静脉采血，注射后开始准确无损收集排泄物 48hr,测定各时间点的 去蛋白血浆比放射性强度及48hr内排泄物的比放射性强度，通过强饲 不同饲粮时，去蛋白血浆与排泄物内源Leu比放射性强度间的比例， 证明S凡i/SRpi=K成立 (K为常数) (2)在 (1)的基础上，推算出实际含氮饲粮条件下的内源 AA 损失量。以NFD的AA模式为内源AA模式，用K值推算出强饲两种 CP为20%的饲粮时的各AA的内源损失量。 (3)通过微积分分析，推算出最佳采血时间，简化该方法的操作 、厂/ 程序，降低成本。厂’ 试验的主要结果如下: (1)本研究进一步表明一次注射法具有一定的可行性。由于绝食 组和NFD组排泄物中检出的AA全部为内源氨基酸，这两种处理48hr 排泄物中内源Leu比放射性强度与相应血浆游离Leu比放射性强度的 48hr内定积分值之比分别为0.0643士0.0012和0.0678士0.0008，经检验 差异不显著 (P0.05)，从而证明SR}SR,=K的成立。 (2)一次注射法可以较为准确测定实际含氮饲粮时的内源AA损 失量。一次注射法检测的两种CP20%实际含氮饲粮时的总AA内源损 失量分别比NFD法高52.07% (豆粕组)和34.21 (棉粕组)，而且这 两种饲粮组的48hr内源AA损失总量分别为25081.94mg/kgDMI豆粕 组)和22136.00mg/kgDMI(棉粕组)，经检验差异不显著 (P0.05), 表明在相同蛋白质水平条件下，试验动物内源氨基酸的损失量趋于恒 定。 (3)通过微积分分析，最佳采血时间应为静脉注射同位素护H]Leu 后35hro [关键词1蛋青鸡;内源氨基酸;同位素稀释技术;一次注射法 1缩写符号] AA:氨基酸 AA,:合成氨基酸 ANFS:抗营养因子 CP:粗蛋白质 DM:干物质 DMI:干物质摄入量 EHC:酶解酪蛋白 FAA:游离氨基酸 HA:肌基化法