CD58对妊娠山羊子宫内膜淋巴细胞分泌活动的影响.pdfVIP

CD58对妊娠山羊子宫内膜琳巴细胞 分泌活动的影响 摘 要 为了查明CD58对妊娠山羊子宫内膜琳巴细胞((EML)分泌IL-2, IL-4,TGF0，及TGFAZ的影响，本实验进行了预实验和正式实验. 预实验采用酶消化及密度梯度离心法分离妊娠家兔EML，并采用唾 哇蓝(MTT)法·进行体外活化试验。位式实验从妊娠山羊获取EML, 并进一步采用免疫磁珠负分离法从中分离CD4-y8T细胞。同时， 利用MTT法研究了CD58(Et花结形成抑制率为58.89%),孕酮 (long/mL)及雌酮 (40pg/mL)对EML及YST细胞的体外活化 作用。另外，应用克隆化小鼠细胞毒性T细胞 (CTLL)对EML分 泌IL-2的水平进行生物学测定，并应用ELISA试剂盒分别测定了 EML产生;L-4及，。T细胞分泌TGF31，和TGFPZ的水平.万~ 预实验首次证明，孕兔子宫内膜经1.25g/L的胰酶0^-4℃消化 7h30min-8h55min，所获淋巴细胞在体外培养48h是孕兔EML 制备及体外培养的可行方案，培养出的淋巴细胞适合用唾哇蓝(MTT) 比色法进行活性检测. 正式实验表明，在山羊妊娠早期20d-32d，生理水平的孕酮单 独作用对EML的体外活化有显著的剂量依赖性促进作用，但是对妊 娠76d山羊的EML，则是稍低浓度孕酮的促进作用强于生理浓度。 CD58对妊娠山羊EML的活化呈现一致的剂量依赖性促进作用，并 且对妊娠16d-32dEML的促进作用极显著. 浓附植前后，妊娠山羊EML有低水平的IL-2产生，但CD58对 其分泌IL-2的作用无明显影响.CD58能促进同时期EML分泌IL-4e 对妊娠20d-32d子宫粘膜y6T细胞，PHA-P始终是强有力的激活 剂.但是，对妊娠20d子宫粘膜y8T细胞，生理浓度的孕酮有显著 的激活作用，而CD58的活化作用较弱.对妊娠32d子宫粘膜yST细 胞，CD58和孕酮都有明显的活化作用，而且CD58的活化作用强于孕 酮。 妊娠早期山羊母胎界面yST细胞能分泌一定水平的TGF0I及 TGFIS,.PHA一能极显著地增加其分泌水平。CD58与孕酮共刺激 协T细胞产生的TGFIS,及TGFP:虽然与细胞对照差异不显著，但 分别达到1.44ng/ml和0.77ng/ml。分别接近或超过抑制小鼠T细胞 体外增殖的浓度 ((2ng/ml和0.5ng/ml).因此，CD58及孕酮对妊娠 期子宫局部免疫耐受有一定的促进作用。沁/ 总之，在山羊妊娠早期的10^-32d，处在第一个分泌高峰的孕酮， 能促进EML分泌低水平IL-2，并且与CD58共同促进子宫局部IL-4 的分泌。妊娠30d时，孕酮与CD58虽然对子宫局部y5T细胞分泌TGF ps的作用无显著的统计学影响，但也表现微弱的促进作用，并且刺 激yST细胞分泌TGF0:的水平高于TO31:水平，证明诸因素优先促 进了Th2型细胞的活化。对妊娠维持有重要作用。这些发现，不仅 是山羊妊娠早期子宫局部免疫调节中的新发现，而且对提高胚胎移 植成功率、控制免疫因素引起的胚胎丢失等都有重要的指导意义。 关健词:CD58;激素:山羊:子宫内膜琳巴细胞;细胞因子; EffectsofCD58onthesecretionofendometrial lymphocytesfrompregnantgoat Abstract ThepurposeofthisexperimentistotesttheeffectofCD58onthesecretion ofIL-2,[L-4,TGF-0,andTGF-0:bygoatEML. Intrialexperimentendometriallymphocyte(EML)frompregnantrabbitwere obtainedbydigestionwithtrypsinandthenbydecenfugation.Theactivationof EMLculturedinvitroweretestedwithMTTassay. InformalexperimentsCD4YSTcellswereobtainedfromtheEML isolatedfrompregnantgoat.Th