重组腺相关病毒人凝血因子Ⅸ基因无创途径基因治疗血友病B安全性研究.pdf

摘要 血友病B是一种FIX基因缺陷所致的x连锁隐性遗传性出血性疾 病，基凼治疗足唯。能治愈此病的方法。目前世界上主要给药方式均 为有创，而以肠上皮细胞为靶细胞，通过灌肠给药，则避免了有创的 治疗方式。奉实验室前期实验已经证实，重组腺相关病毒载体／人凝 染肠上皮细胞并能够表达具有生理活性的hFIX。 性，为进一步的临床实验提供了基础。 明小鼠／血友病B4,鼠实验组小鼠，采用酶联免疫吸附实验(ELISA) 的中和抑制性抗体(抗hFⅨ抗体)，采用PCR技术以及免疫组化检测 hFⅨ目的基因在实验组小鼠的心，肝，脾，肺，肾，结肠，脑，卵巢 组织中的分布，行局部病理切片，了解结肠黏膜的病理改变。 降，第35天，IgG抗体水平仍是灌肠前的3倍左右；血友病B小鼠的血 浆中可检测到小鼠血浆中的中和抑制性抗体(抗hFIX抗体)；第14天 中和抑制性抗体(抗hFIX抗体)水平下降速度趋缓，仍然有7—8B．U／ml 充右。3．实验组血友病Bd鼠的心，肝，脾，肺，肾，结肠，脑，卵‘ 巢组织DNA经PCR扩增后，其产物电泳结果显示：在结肠组织所在的 确实含有11FⅨ基因，但其他组织未扩增mhFIX基因。在灌肠后第21 天血友病B小鼠实验组免疫组化检测镜检显示：结肠黏膜卜-层被染成 深棕色，黏膜层不明显。4．在灌肠后第2l天血友病Bd鼠实验组HE 染色玻片镜检显示结肠组织结构正常，无水肿，无炎性细胞浸润。 ‘结论：灌肠途径给予血友病B小鼠／昆明小鼠rAAV2／hFIX后，小 鼠体内产生了抗重组腺相关病毒的抗体和中和抑制性抗体(抗hFIX抗 体)；目的基因仅分布在结肠组织中，没有扩散到其他组织；小鼠结 肠局部无明硅炎性反应。对于血友病Bd,鼠／昆明小鼠而言，重组腺相 关病毒灌肠给药途径基因治疗血友病B在所观测的时间内是安全的。 关键词2型重组腺相关病毒，血友病B4,鼠，基因治疗，灌肠， 安今性 ABSTRACT an Bis X—linked disordercaused Hemophilia bleeding mutations by inthe blood factor hag geneencodingcoagulationIX(FIX)．Gene therapy anideal for B．In recentstudies provided therapeuticstrategyhemophilia Theroutineroutesofadministrationareinvasive．If cells colon-epithelial canbe ofrecombinant delivery available，gut-targeted viralvector willbe serotype2(rAAV2)bycoloclysis，it indicatedthat cellscould previousexperiments colon-epithelialproduce hFIX with transfection