RAPD-PCR技术及其在昆虫学研究中的应用综述.pdfVIP

第 71 卷 自 O 01 年 21 月 武 夷 科 学 V o l . 17 户 W U YI SCIE N CE JOU R N A L D ec . 2 0 0 1 文章编 号 : 100 1-4276- ( 200 1) 0 1- 0073- 0 RAPD - PCR 技 术及 其在 昆虫学研 究 中的应 用 综述 赵怀玲 ‘尤 民生 “ ( 福‘建农业大学生物防治研究所 350002 ; 福建农业大学植物保护系 350002) 摘要 聚合酶链反应((Polymer ase Chain React ion ，简称 PCR ) 技术是一项可在生物体外对特定DNA 序列进 行快速扩增的新技术 。随机扩增的多态性DNA 技术(Random amplified polymorphic DNA , 简称 RAPD) 是一 项基于 PCR 技术上的DNA 分子水平上的大分子多态检测技术 。本文对该技术在 昆虫学研究领域 的应用状 况做 了一个系统的收集和整理 ，认为它在 昆虫分类 、系统进化 、抗药性机理及抗性基 因检测等方面的研究 中具 有着广泛的应用前景 ，而且它的应用前景随着技术和统计方法的完善将更加广阔。 关键词 RAP D - PCR , 昆虫学 ，应用 中图分类号 :Q 65 文献标识码 :A 聚合酶链反应(Polymerase Chain React ion ，简称 PCR ) 技术是 由美 国PE - Cetus 公司人类 遗传室的Kary Mullis 于 1 85 年发明的一项可在生物体外对特定DNA 序列进行快速扩增的 新技术 。并且 ，随着耐热Taq DNA 聚合酶的应用和 自动化热循环仪的设计成功 ，使 PCR 技术 的操作程序变得更加简化 ，因此便很快在世界各地被广泛地应用于基因研究的各个领域 ，并被 在科技界享有盛誉 的美 国 “科学( SCIENCE ) ”杂志评为 1 8 年度十大科技新 闻之一 ，成为全 世界引用频率最高的文献 。其发明者Kary Mullis 因此而与开创了 “寡核昔酸基 因定点诱变”方 法 的加拿大籍英 国科学家 Michael Smith 共获 1 3 年诺 贝尔化学奖 。 随机扩增 的多态性 DNA 技术(Random amplified polymorphic DNA ，简称 RAPD ) 是 由 Williams 和 Welsh 2 个研究小组 同时发展起来的一项基于 PCR 技术上的DN A 分子水平上的 大分子多态检测技术 。因为它的简便、快捷等特点 ，使它迅速被用于基 因的多态分析上 。 作为一项新兴 的技术 ，PCR 及 RAPT) 也被引人 了昆虫学 的研究领域 中，被应用于 昆虫种 下分类 、近缘种鉴定、地理种群区分 、抗性研究、抗药性种群的区分、寄生植物与寄主关系、昆虫 迁 飞与扩散等 问题 的研究 。 1 PCR 技术 P CR 技术 的原理与细胞 内发生 的DNA 复制过程十分相似 。首先是双链 DNA 分子在临 近沸点的温度下加热时会分离成两条单链 的DNA 分子 ，然后 DNA 聚合酶 以单链 DNA 为模 板并利用反应混合物 中的4 种脱氧核昔酸三磷酸((dNT Ps ) 合成新 的DNA 互补链 。然后反应 混合物经再次加热使新、旧两条链分开 ，并加入下轮的反应循环 ，即引物杂交、DNA 合成和链 收稿 日期 :200 1- 05- 20 作者简介 :赵怀玲( 1 76- ) ，女 ，在读硕士生 ，研究 向: 病虫生物 防治. . 7 4 · 武 夷 科 学 第 17 卷 的分离 。经几次循环后 ，得到两条 引物结合位点间的DNA 区段 的拷贝数 ，其理论上 的最高值 是 2 的n 次方 。 PCR 有两个重要特性 ，一是能指导特定 DNA 序列的合成 ，二是特定序列 的大量扩增 。 DNA 聚合酶能 以单链 DNA 为模板 ，合成 1 个与其互补的新链 。将双链 DNA 加热至近 100 ℃时，DNA 变性 ，形成两