60种抗体免疫组化法对胚胎不同组织抗原的研究.pdf

60种抗体免疫组化法对胚胎不同组织抗原的研究 摘要 目的：分化、衰老和肿瘤都伴随蛋白质表达的变化。一种细 胞可以表达多种蛋白质，在通常情况下，一种蛋白质又可以在多 种细胞中表达。研究蛋白质表达及分布规律对于进一步认识分 化、衰老和肿瘤都有非常重要的意义。本研究通过对60种抗体 免疫组织化学方法染色七种胚胎组织结果的分析，试图寻找蛋白 质在组织细胞中的分布规律。／包括以下两点内容：。 第一、分析蛋白质分布规律属于以下四种分布规律的哪一 种。 1、各个蛋白质的表达是彼此互无联系的独立事件： 2、蛋白质整组表达，即在一种细胞中表达的蛋白质在另种 细胞中不表达，如果在不同细胞中检测到相同的抗原性，亦属于 不同的基因编码； 3、若干种蛋白质以小组形式一起在细胞中表达，即该小组 成分中有一种表达，其余成分也同时表达。每种细胞中可能有多 个不同小组； 4、蛋白质在细胞中的表达呈不固定成组搭配形式，即某些 蛋白质在某种细胞中有成组表达倾向，但是又不绝对固定。 第二、将胚层起源较近的和起源较远的组织细胞中蛋白质分 布情况做相关性分析，比较分析蛋白质的分布状况与胚层起源的 关系。吱 ／实验材料本研究取水囊引产19周龄的正常胎儿为实验标 本，切取七种胚胎脏器，包括肝脏、脾脏、肾脏、胃、皮肤、肺 脏和胸腺，用10％福尔马林固定，常规石蜡包埋，切成5微米切 片，经过展片、捞片及烤片等过程处理后，制成标本片。 随机选取60种抗人组织抗体，抗体种属、来源及特异性如下： 23种兔抗人抗原抗体，亲和层析纯化，针对的抗原包括Gao， Trk，Gai，NFkbp65，Raf，GDNF，TGF，IL一2R a，C～Fos，P15， Gas，C-hbl，JAKl，ERK2，FAX。均为美国Santa Cruz公司生产， 购自北京中山生物技术公司； 7种小鼠抗人抗原单抗，其针对抗原包括CEA，PCNA，C-Myc， CyclinDl美国Santa Cruz公司生产，购自北京中山生物技术公 司；TFr，ALP为河北医科大学免疫室制备；抗人MDM2单抗 (5D11C4)为本室制备。 30种其它单克隆抗体为本研究室制备，它们是：FMCl，FMCll， SH5F8， 4F6H12G5 免疫组化显色系统采用生物素标记的对应抗体(兔抗小鼠或 羊抗兔)，辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素和DAB。 实验方法60种抗体对着七种胚胎脏器的组织切片做免疫组 化法染色，共有420张染色片，苏木精复染，显微镜下观察，高 倍视野照相。依据照片和镜下观察确定细胞类型、确定抗体染色 强度、部位及组织细胞染色比例。记录结果并归纳入统计表，用 EXCEL统计软件统计学分析蛋白质在细胞中的分布情况。 实验结果 本研究用60种抗体对着七种胚胎组织做免疫组 化染色，得出如下结果： t．染色片子数目、染色比例及染色强度60种抗体对着七种 组织共染色420张片子，就某类细胞而言，一旦染色，着染比例 在50％以上(判为阳性)，个别着染比例在5％以下(判为阴性)， 实验中未见着染比例在5-50％之间者。7种组织共划分出19种细 胞类型，记录每种细胞类型对着60种抗体的染色结果，共有1140 个记录，哭中显不一、±、+、++、+++的染色数目及百分 ‘ 284(24．91％)。 2．细胞类型的划分根据细胞形态及组织中的分布特征区分 细胞类型，七种组织共划分出19种细胞类型。 3．受测抗原组织分布60种抗体染色七种组织，对应抗原没 有一种仅在一种类型细胞中表达，CEA在3种细胞中表达，为表 达细胞类型最少的抗原。以19种细胞类型两两做排列组合，共 有171种组合，观察这些组合细胞中共同表达的蛋白质类型，每 一组共表达的蛋白质在细胞类型中表达的实际频率为2／19，计算 这些共同表达的蛋白质类型同时出现