(09级兽医27学时)实验四细菌的染色(3学时).pptVIP

实验四 细菌的染色 目的：1、了解细菌革兰染色的原理 掌握革兰染色方法 2、 学习掌握芽孢染色方法内容： 1、涂片 2、革兰染色、芽孢染色 细菌染色的目的意义： 细菌菌体微小、而且折光率低，在显微镜下特别是在油浸物镜下几乎与背景无反差，很难看清楚，如将其染色，使折光率增大，便容易观察。由于菌体的性质及各部分对某些染料的着色性不同，因此可以利用不同的染色方法来区别不同的细菌及其结构。 染色剂分类： 碱性染色剂：（电离后分子带正电荷）；碱性染色剂主要用于 染核和异染颗粒等细胞结构。 酸性染色剂：（电离后分子带负电荷）；酸性染色剂主要用于 染细胞质。 复合染色剂：（在电离后分子不带电荷，故也称为中性染色 剂）；复合染色剂主要用来染螺旋体和立克次 体。 涂片染色程序：涂片 自然干燥 固定 染色干燥 镜检 细菌涂片示例： 革兰染色可将所有的细菌分为两大类，蓝色的革兰阳性菌和红色的革兰阴性菌。是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法。 革兰染色步骤为：紫、碘、酒、红四步。1、草酸铵结晶紫染色1-2 min（碱性染料着染)，水洗； 2、革兰氏碘液染1-3 min（媒染剂媒染)，水 洗； 3、酒精脱色30s左右（脱色剂)，水洗； 4、稀释的石炭酸复红30s— 1min（复染），水洗。  干燥 ， 镜检。 革兰阳性菌：细胞壁肽聚糖层厚，交联而成的肽聚糖网状结构致密，经乙醇处理发生脱水作用，使孔径缩小，通透性降低，结晶紫与碘形成的大分子复合物保留在细胞内而不被脱色，结果使细胞呈现紫色。革兰阴性菌：细胞壁肽聚糖层薄，网状结构交联少，类脂含量较高， 经乙醇处理后，类脂被溶解，细胞壁孔径变大，通透性增加，结晶紫与碘的复合物被溶出细胞壁，因而细菌细胞被脱色，再经石炭酸复红复染后细胞呈红色。 革兰染色步骤 革兰染色时注意事项：1、要用幼龄培养物作革兰染色；2、涂片不宜太厚，以免脱色不完全造成假阳性 特殊染色法 是对细菌特殊结构进行染色的方法。包括芽胞染色、荚膜染色、鞭毛染色等。 芽胞染色原理：细菌的芽孢壁比营养体的细胞壁结构复杂而且致密，透性低，着色和脱色都比营养体细胞困难。 方法：采用碱性染料微加热着染或延长染色时间，使营养体（菌体）和芽胞都着色后，再脱去营养体细胞的颜色而保留芽胞的颜色，再用其他颜色的染液着染营养体方法，并可在显微镜下区别。 孔雀石绿—沙黄法染色步骤 芽胞染色结果是：营养体染成红色，芽孢染成绿色。 思考题1、革兰染色的关键步骤是什么？2、当你对未知菌进行革兰染色时，怎样保 证操作正确，结果可靠？3、进行革兰染色时注意那些事项？ 4、怎样使芽孢着色？5、什么是染料，分几种？细菌染色常用哪几种？ 作业：原理、方法、结果、分析讨论及绘图、思考题。 绘图：绘出用革兰氏染色法染出的细菌形态图要求：视野要圆；细菌的大小要合理；并写出菌名及放大倍数；用铅笔。标出染的细菌种类及颜色。 * * * * * * * * * * 水 涂片 草酸铵结晶紫 碘 液 95%酒精 稀释的 石 炭酸复红 自然干燥 媒染 2-3min 脱色20~30s 固定 初染1-2min 复染10~30s 干燥镜检 接种环 蒸馏水 滴水 涂片 沙黄复染 水洗脱色 孔雀石绿 自然干燥 脱色20~30s 固定 初染7min 复染10~30s 干燥镜检 接种环 蒸馏水 孔雀石绿 蒸汽