1紫外-可见光光度法.pptVIP

第十二章 紫外 - 可见分光光度法;一、光化学分析法; 在光谱分析中，依据物质对光的选择性吸收而建立起来的分析方法称为吸光光度法,主要有: 红外吸收光谱：分子振动光谱，吸收光波长范围2.5?1000 ?m ,主要用于有机化合物结构鉴定。 紫外吸收光谱：电子跃迁光谱，吸收光波长范围200?400 nm（近紫外区） ，可用于结构鉴定和定量分析。 可见吸收光谱：电子跃迁光谱，吸收光波长范围400?750 nm ，主要用于有色物质的定量分析。 本章主要讲授紫外--可见吸光光度法。; 二、光的基本性质 光是一种电磁波，具有波粒二象性。 （1）光的波动性：光可用波长?、频率?、光速c、波数cm-1 等参数来描述： ? ? = c ； 波数 = 1/ ? = ? /c （2）光的粒子性：光是由光子流组成， 光子的能量：E = h ? = h c / ? （Planck常数：h=6.626 × 10 -34 J × S ) 光的波长越短（频率越高），其能量越大。 白光(太阳光)：由各种单色光组成的复合光 单色光：单波长的光(由具有相同能量的光子组成) 可见光区：400-750 nm 紫外光区：近紫外区200 - 400 nm 远紫外区10 - 200 nm （真空紫外区） ;三、 物质对光的选择性吸收及吸收曲线;四、紫外—可见吸收光谱;图示;吸收曲线的讨论：;第十二章 紫外 - 可见分光光度法 第二节基本原理;一、吸收光谱的产生（一）紫外—可见分子吸收光谱的产生;能级跃迁;讨论：;（二）、分子吸收光谱中电子跃迁类型;?⑴　σ→σ＊跃迁;? ⑶ π→π＊跃迁;（三)紫外光谱中的常用术语;红移与蓝移;( 四) 、吸收带;3．B带：由π→ π*跃迁产生 芳香族化合物的主要特征吸收带230-270nm， λmax =254nm， εmax=220 宽带，具有精细结构； 极性溶剂中，或苯环连有取代基，其精细结构消失;图示;图示;图示;5.电荷转移吸收光谱;6.金属配合物的紫外—可见吸收光谱;二、光的吸收定律;光的吸收定律;设：单位质点俘获光子的截面积a, 在距离dx内共有质点数为dn，在距离dx内俘获光点总面积为ds=dn?a , s为光束通过溶液的截面积则：;; A 称为吸光度(Absorbance)，这个关系式是定量分析的最基本依据。;三、吸光系数;朗伯—比耳定律数学表达式;摩尔吸光系数ε的讨论;摩尔吸光系数ε的讨论;第二节 吸光光度法的误差;一、偏离朗伯—比耳定律的原因;(一)化学因素：吸收定律本身性质的限制 只有在稀溶液(低含量)时才能成立。在高浓度(通常＞0.01mol·L-1)时吸收质点之间的平均距离缩小到一定程度，邻近质点彼此的电荷分布相互受到影响，改变了它们对特定辐射的吸收能力，影响程度取决于浓度。 仪器分析大都涉及到一个化学反应问题。当然也涉及到化学平衡，如二聚平衡，酸-碱平衡，配合平衡等反应中平衡的任何移动都会影响吸光度发生波动，导致对Beer-Lambert定律的偏离。 如： Cr2O7２－ + H2O = 2HCrO4- = 2H+ + 2CrO4 2- ; 再如用水杨酸测定Fe3+，由于pH值的不同，形成具有不同的配位数，不同颜色的络合物。 pH＜4 Fe(C7H4O2)+ 紫红色 4＜pH＜9 Fe(C7H4O2)2- 棕橙色 9＜pH Fe(C7H4O2)3- 黄 色 因此在化学反应中，反应条件是至关重要的，任何一个条件变化都会引起平衡的移动，其结果将使吸光度变化，与真正予期的吸光值发生偏差。;（二）物理因素： 1.非单色光引起的对吸光定律的偏离;对吸收光谱而言，b 和 c 固定，; 2.杂散光 不在谱带范围内与所需波长相隔甚远的光。 若样品不吸收杂散光，产生负偏离；样品吸收杂散光，产生正偏离 3.散射光 在理想状况下，吸收介质的光学性质必须是均匀的，但是在实际工作中，由于种种原因，会使试样溶液不澄清，发生混浊，产生了散射光，产生假吸收，降低透射光的份额，使测定吸光度值偏高，而偏离吸收定律。 如试样本身为一生物组织液，或加了保护胶之类的物质，也或者使用了已生长了微生物的离子交换水，或含有杂