盐胁迫下旱柳cDNA文库构建及耐盐基因筛选.docVIP

内 容 摘 要 土壤盐碱化导致的盐胁迫是抑制植物生长、降低农作物产量、减少林木生长量的 主要环境因素，严重影响现代农业和林业的发展。研究植物耐盐分子机理和培育耐盐 新品种，对开发和利用盐碱地具有重要意义。旱柳（Salix matsudana Koidz）抗旱、 耐盐能力强，是进行耐盐机理研究和挖掘耐盐基因的良好材料。但目前国内外对旱柳 在耐盐机制和耐盐基因开发利用上研究有限，所以有必要深入研究，利用旱柳这一宝 贵资源开发耐盐抗旱的优良基因，为林木及作物的抗逆育种提供新的途径。 本文构建了 100mmol/L NaCl 胁迫处理的旱柳 cDNA 文库，利用不同梯度浓度的 NaCl 胁迫处理酵母转化子以筛选文库。筛选到的阳性克隆提取质粒 DNA，进行 PCR 鉴定、测序，初步筛选到了两个耐盐相关的新基因，通过生物信息学技术分析基因序 列，预测了蛋白质结构和功能；通过实时荧光定量 PCR 对其表达模式做出了分析。 主要结果如下： 1）构建了盐胁迫下旱柳全长 cDNA 文库。通过质粒检测和 PCR 鉴定，外源基因 已成功转入酵母受体细胞，插入 cDNA 片段均在 500-2000bp 之间，平均长度在 1000bp 左右，说明文库质量较高。旱柳全长 cDNA 文库的构建，为对其进行功能基因组研究 创造了前提和基础。 2）通过逐步提高盐浓度来筛选盐胁迫下旱柳全长 cDNA 文库，得到两个耐受 130g/L 的酵母转化子，提取阳性克隆的质粒并通过 PCR 扩增检测，两个插入片段分 别为 615bp 和 1152bp，并对其测序，序列比对结果表明 1152bp 的 cDNA 是耐盐相关 基因。 3）生物信息学分析表明，该基因序列于 32-328 位存在一个长 297bp 的开放阅读 框，编码 98 个氨基酸。实时荧光定量 PCR 分析结果显示，该基因是盐胁迫下表达的， 盐胁迫两小时后，该基因的表达水平开始发生变化，表达量开始上调，随着胁迫时间 的增长，表达量相对增加，在 12-24h 达到表达高峰。 关键词：旱柳 盐胁迫 cDNA 文库 耐盐筛选 基因克隆  II Abstract Salt-stress caused by the salinization of soil is a main environmental factor restraining plant growth and yield, which severely restricts the development of modern agriculture and forestry. Studies on the molecular mechanism of plant salt-tolerant and cultivating new variety of plant resisting salt-stress are of great significance for developing and utilizing saline-alkali soil. Salix matsudana Koidz is a good material to study the salt-resistance molecular mechanism and search new gene salt-tolerant because it has a high ability to resist drought and salt stress. Now away, the studies on salt-resistance molecular mechanism and searching new gene salt-tolerant are limited both at home and abroad. It is necessary to use this valuable resource to develop drought-tolerant gene. It will provide a new breeding way for forest and crops to improve salt tolerance. A cDNA library was constructed from the tissue of Salix matsudana Koidz treated with 100mmol/L NaCl. Different concentrations of NaCl stress was carried out to deal with yeast transformants library. Two salt-related gene in