口服Ag85A DNA疫苗诱导肠道IEL亚群及其生物学活性变化.pdf

·中文论著摘要· DNA疫苗诱导肠道IEL亚群 口服A985A 及其生物学活性的变化 目 的 今年年初世界卫生组织发布的《2009年全球结核病控制报告》中指出，目前 全球结核菌感染人数超过20亿，其中结核病患者或可能发病者约占1／10。我国约 有5．5亿人已经感染结核杆菌，现有活动性肺结核患者约450万。全世界耐多药／ 广泛耐药结核病例数约为50万，我国是其中总数排名前五位的高负担国家之一。 目前卡介苗(BCG)作为唯一临床使用的疫苗，预防效果并不稳定。因此研制新疫 苗成为当前结核病防治的首要任务。 BCG作为一种减毒活疫苗，除用于预防结核病外，也作为一种强的非特异性 细胞免疫刺激剂，用于肿瘤(如膀胱癌等)的治疗。研究还证明BCG与动物和人 等一些肿瘤细胞间存在着共同抗原。但BCG灌注治疗膀胱癌的毒副作用也常使部 分患者因不能耐受其副作用而不得不终止BCG灌注治疗。 A985复合物是由A、B、C三种成分组成，存在于结核杆菌和BCG等分枝 杆菌的细胞壁及培养滤液中。在BCG A985的三种成分中A985A所占的比例最 大，而且多项研究表日flJAgS5A抗原是一种十分重要的免疫保护性抗原。近年来的 胞因子，如IL．2、IFN-7、TNF．也等的产生水平升高；促进NK细胞、单核。巨噬细胞 等对肿瘤细胞的杀伤作用。但由于结核分枝杆菌生长缓慢，并且需要较复杂生长 条件，从细菌菌体中提取A985A蛋白易发生凝集和降解，更难于纯化。同时A985A 作为一种异种蛋白质长期使用仍有可能发生变态反应等不良反应。1996年Huygen 掣23】首次报道用结核分支杆菌A985A编码基因的质粒DNA经肌肉接种途径免疫 小鼠，可诱导小鼠产生很强的细胞和体液免疫应答，抵御结核分支杆菌的攻击。 自90年代初首次报道应用DNA疫苗进行免疫以来，大量的研究已经显示了 DNA疫苗的实际效果和广阔的应用前景。近些年来已将DNA疫苗的应用研究扩展 到了抗感染、抗肿瘤、治疗变态反应性疾病和自身免疫病及降低组织器官移植排 斥反应等多个领域。DNA疫苗可经多种途径(如粘膜、皮肤和肌肉等)和采用多种 方式(如口服、喷雾和注射等)接种，依据所含目的基因及表达产物的不同可致 机体产生免疫应答上调或下调及免疫应答的类型不同。经口服进行DNA疫苗接种 是一种简便、易于被人们接受的方式。但口服DNA疫苗在黏膜局部的表达情况和 诱导局部的免疫细胞，特别是IEL的变化，目前尚不清楚。为此，我们采用经口灌 DNA疫苗，在观察肠道局部细胞表达的基础 饲的方式给小鼠投与自制的A985A 上，对其诱导的IEL亚群及生物学功能的变化进行了研究，目的是探讨经口服途径 DNA疫苗有否预防和治疗效应。 接种分枝杆菌A985A 材料与方法 l、重组质粒pcDNA3．1／myc—hisA-A985A的构建 --70℃保存备用。 DNA疫苗的制备 2、A985A 粒转化到减毒伤寒沙门氏菌ST7207菌苗，经大量培养细菌制成由减毒伤寒菌苗携 带的A985ADNA疫苗。 TM DNA疫苗。 2000包裹，制成脂质体包裹的A985A 3、动物分组与免疫 DNA疫苗诱导小鼠肠IEL亚群的变化：将C57BL／6小鼠随机分 检测A985A 成3组，即重组质粒组、空质粒组和正常对照组。每只鼠免疫3次，前二次免疫 间隔10天，后二次免疫间隔14天。重组质粒组前二次经口灌饲脂质体包裹A985A 组小鼠口灌饲减毒伤寒菌．pcDNA3．1菌和生理盐水作为对照。末次免疫后3周检 测IEL亚群。 2 DNA疫苗诱导小鼠肠IEL的生物学功能变化：将C57BL／6小鼠 检测A985A 随机分成3组，即重组质粒组、空质粒组和正常对照组。每只鼠免疫2次，间隔 2周。重组质粒组经口灌饲减毒伤寒杆菌-A985ADNA疫苗菌液；空质粒组和正常 对照组以同样方法