盐芥Thellungiella halophilaThGPX2和ThGPX6基因克隆和功能初步研究.pdfVIP

摘 要 盐胁迫是影响农作物生长和产量的最主要的非生物胁迫之一。随着人口增 加、社会经济发展及自然气候条件变化，水资源短缺、土壤盐碱化的形势同益加 剧，世界上约有20％可耕地及40％的灌溉地受到不同程度的盐渍化影响，我国 有3亿多亩盐渍化土地，约占全国可耕地面积的25％。盐渍化严重影响农业生 产，成为最主要的严重影响到社会经济发展的环境因素之一。长期以来，国内外 对盐渍化土地的改良和利用开展了广泛的研究。由于盐生植物可能具有进化上与 非盐生植物截然不同的信号转导途径和调节控制机制，因此人们利用基因工程手 段，从盐生植物中分离和克隆与耐盐有关的关键基因，培育转基因耐盐植物和农 作物，开发利用盐渍地，利用生物技术改善目前的环境现状。开展盐生植物耐盐 相关基因的研究不仅可以了解盐生植物的耐盐机制，而且可以为开发利用盐生植 物耐盐基因资源、培育耐盐作物品种奠定基础。目前开展盐生植物耐盐相关基因 的研究已逐渐成为国际上植物耐盐研究领域的一个热点。 高盐、低温、干旱等不良环境易引起植物的抗氧化反应，氧化胁迫可诱导 植物多种防御酶的产生，其中包括超氧化物歧化酶(SOD)、抗坏血酸过氧化物酶 氧过程中起着不同的作用，GPX是动物体内清除氧自由基的主要酶类。最近几 年研究表明，植物体内也存在类似于动物的GPX家族，并对其功能研究已初见 端倪。 盐芥(Thellungiellahalophila)是与模式植物拟南芥近缘的十字花科植物， 它能够在300mMNaCl的高盐环境下完成生命周期，是一种可以耐受500mM NaCI的真正耐盐植物。作为耐盐模式植物，克隆盐芥中编码清除活性氧的谷胱 甘肽过氧化物基因并研究其功能，对揭示植物的抗逆机理具有重要意义。 本论文利用与拟南芥高度同源性设计简并引物和RACE．PCR技术从盐芥 RACE．PCR技术，从盐芥eDNA中克隆得到一个编码谷胱甘肽过氧化物酶蛋白 RT-PCR对两 的基因，命名为ThGPX6。对这两个基因序列进行分析，采用SQ 个基因在盐胁迫下的表达模式进行了初步研究。 研究表明，从盐芥的eDNA中克隆得到ThGPX2 eDNA的长度为740bp，注 册号FJ357243。通过对开放阅读框及同源性比对分析，该序列的编码区(ol珂) Da，等电点为5．48，具有 共510bp，编码170个氨基酸，分子量约为19020．62 GPX家族的保守结构域，证实ThGPX2属于谷胱甘肽过氧化物酶家族成员。从 盐芥的eDNA中克隆得到ThGPX6 过对开放阅读框及同源性比对分析，该序列的编码区(ORF)共702bp，编码234 个氨基酸，分子量约为25937．68Da，等电点为9．35，具有GPX家族的保守结构 域和PHGPX的特征结构域，证实ThGPX6属于谷胱甘肽过氧化物酶家族成员中 的PHGPX。 通过SQ 中的表达趋势都是随盐胁迫程度的增加先升高后降低，叶是在300mM时达到最 高，根是在200mM时达到最高。盐芥中的ThGPX6在叶和根中的表达趋势有所 不同。ThGPX6在叶中的表达模式是随盐浓度的增加而升高，而在根中表现为先 升高后降低，在300mM盐处理时最高。乃黜和ThGPX6在根和叶中的表达 丰度均高于对照组，且在一定范围内与盐胁迫强度呈正相关，由此说明，ThGPX2， 乃蚴在盐芥中均属于诱导表达基因。 关键词：盐芥、谷胱甘肽过氧化物酶、半定量RT-PCR、磷脂氢谷胱甘肽过氧化 物酶 Abstract stresseswhichaffectsthe ofthemost abiotic growth Saltstressisone important of of and of