不同磷脂配比构成的脂蛋白对J774细胞胆固醇转运和SRBI表达的影响.doc

原创性声明 本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作 及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方 外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获 得南华大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的 朋友对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。  作者签名：  日期：  年  月  日  关于学位论文使用授权说明 本人同意南华大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权 保留学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的 全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保留学位论文；学校 可根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文。  作者签名：  导师签名：  日期：  年  月  日 不同磷脂配比构成的脂蛋白对J774巨噬细胞 胆固醇转运和SR-BI表达的影响 研究生：孙 琳  导 专  师：易光辉 教 授 业：病理学与病理生理学  中文摘要 研究背景： 动脉粥样硬化（As）是一个多因素参与、多基因异常的疾病，以细胞内胆固醇 平衡失调、胆固醇代谢障碍为特征。泡沫细胞的形成是As的核心环节。胆固醇代谢 失衡贯穿于泡沫细胞形成的整个过程。B类I型清道夫受体（scavenger receptor class B type I，SR-BI）是细胞膜上的一种清道夫受体，在动脉硬化的发生发展过程中发挥 了重要的生物学功能。SR-BI在肝脏中表达可促进HDL胆固醇酯的选择性摄取，由此 被认为在逆向胆固醇转运中发挥重要作用。高密度脂蛋白（HDL）可通过多种机制 发挥抗动脉粥样硬化作用。有研究显示：富含磷脂的HDL可以促进细胞胆固醇流出， 减少在细胞内蓄积。而且重构高密度脂蛋白颗粒中磷脂分子的物理性质显著影响颗 粒清除细胞游离胆固醇的能力。本研究意在探讨不同磷脂配比重构的脂蛋白对J774 巨噬细胞胆固醇转运和SR-BI表达的影响。 目的： 研究不同磷脂配比构成的脂蛋白rHDL-A1、rHDL-A2、rHDL-A3、rHDL-B1、 rHDL-B2对J774巨噬细胞胆固醇转运的影响；观察不同磷脂配比脂蛋白rHDL-A1、 rHDL-A2、rHDL-A3以及不同浓度的rHDL-A3对J774巨噬细胞SR-BI表达的影响。 方法： 取新鲜抗凝血浆，用超速离心法进行密度梯度离心，收集LDL、HDL3。将LDL 置于含10μmol/LCuSO4的PBS溶液(pH7.2)中，37℃温育24h；氧化修饰后的LDL置含 2 200μmol/l EDTA的PBS中透析24h。将POPC、CE、Apo A-I、胆酸钠按不同比例 混合反应生成脂蛋白，分别记为rHDL-A1、rHDL-A2、rHDL-A3、rHDL-B1、rHDL-B2。 本实验分为三部分。 第一部分，研究rHDL-A1、rHDL-A2、rHDL-A3、rHDL-B1、rHDL-B2、HDL3对 J774巨噬细胞胆固醇转运有何影响。经oxLDL预处理24小时的J774巨噬细胞分别加入 rHDL-A1、rHDL-A2、rHDL-A3、rHDL-B1、rHDL-B2、HDL3孵育16小时，用高效 液相色谱分析法和液体闪烁计数法检测细胞胆固醇转运情况。 第二部分，主要检测rHDL-A1、rHDL-A2、rHDL-A3对J774巨噬细胞SR-BI表达的 影响：用逆转录聚合酶链反应检测SR-BI的转录表达，用Western Blotting检测SR-BI 的蛋白表达。 第三部分，主要检测不同浓度的rHDL-A3对J774巨噬细胞SR-BI表达的影响：用逆 转录聚合酶链反应检测SR-BI的转录表达，用Western Blotting检测SR-BI的蛋白表达。 结果： I.高效液相色谱分析细胞内胆固醇和胆固醇酯含量变化，oxLDL组、HDL3组、 rHDL-A1组、rHDL-A2组、rHDL-A3组、rHDL-B1组、rHDL-B2组细胞内胆固醇酯 与总胆固醇的比值分别为：49%，23%，39%，36%，32%，29%，24%（P0.05）。说明 用不同含量磷脂重构的脂蛋白处理oxLDL诱导过的J774巨噬细胞CE/TC比值随着磷脂 含量的增加而减少；与oxLDL单独处理的对照组相比，HDL3处理组与重构脂蛋白处理 组细胞CE/TC比值均有不同程度的降低，其中HDL3处理组最为明显。液体闪烁计数法 检测J774巨噬细胞胆固醇流出情况：oxLDL对照组、HDL3组、rHDL-A1组、rHDL-A2组、 rHDL-A3组、rHDL-B1组、rHDL-B2组，各组J774巨噬细胞胆固醇流出率分别为5.24%、 26.59%、15.47%、18.66%、22.57%、20.36%、11.46%（P0.05