鱼腥草HMGR基因片段的克隆及种质亲缘关系的ISSR分析论文.docVIP

硕士学位论文  摘  要  鱼腥草药蔬兼用，原植物为三白草科蕺菜属蕺菜 Houttuynia cordata Thunb.。 具清热解毒，消痈排脓，利尿通淋等功能，是鱼腥草注射液的主要原料药。现代 药理试验证明其具抗菌、抗病毒、利尿作用，还可增强机体免疫功能。本文对鱼 腥草的有效成分、药理作用和临床应用等方面的研究进行分析归纳，认为鱼腥草 生物活性较高，疗效确切，值得进一步推广应用，应进一步加强鱼腥草的基础研 究，研制现代中药新剂型。 近年来鱼腥草的研究集中在其有效成分、药理作用、种植栽培和临床应用等 方面，还鲜有在分子水平上的研究。本文从分子水平初步研究了鱼腥草种质资源， 主要研究内容有以下几个方面： 鱼腥草种子具有休眠特性，自然条件下萌发困难，发芽率低。本文采用低温 层积处理研究解除鱼腥草种子休眠、促进萌发、提高发芽率的方法。结果表明： 低温层积处理能够促进鱼腥草种子发芽，并首次利用鱼腥草有性繁殖进行栽培。 试验中最有效的处理是 4℃层积处理 8d，其发芽率达到 86.0%，芽的生长情况较 其它处理好。 本文还利用 NCBI、DDBJ、Blockmaker、CodeHop 和 Primer Premier 5.0 等数 据库和生物软件进行简并性引物设计了 4 对引物进行 RT-PCR，从鱼腥草种苗中 克隆到 1 个长度为 670bp 的 cDNA 片段。通过 Blast 检索 GenBank 进行同源性对 比后，发现该片段与其他植物的 HMGR 基因具有较高的氨基酸序列同源性。研究 表明，该片段推测为鱼腥草 HMGR 基因片段，该程序化设计的简并性引物可信性 强，能迅速得到满意结果。 利用 ISSR(inter-simple sequence repeat)分子标记技术对 17 份鱼腥草种质进行 了基因组 DNA 多态性分析。从 50 条引物中筛选出 12 条多态性引物用于 PCR 扩 增，共扩增出 112 条 DNA 条带，其中多态性条带 95 条，所占比例为 84.82%，平 均 每 条 引 物 扩 增 的 DNA 条 带 数 目 为 9.33 条 。 根 据 ISSR 扩 增 结 果 ， 利 用 POPGENE1.32 软件计算了 Nei’s 基因距离， Nei’s 基因多样性指数 (H)为 0.3185， Shannon 信息指数 (I)为 0.4699，并用 MEGA3.1 软件通过 UPMGA 法进行了聚类分 析。结果表明：鱼腥草种质资源具有较丰富的遗传多样性； ISSR 技术可将 17 份 供试的鱼腥草材料全部分开，在遗传距离系数 0.2 处可将 17 份材料划分成三大类， 其中多数材料根据 ISSR 遗传距离系数划分的类群与地理位置分布有一定关系。 同时对鱼腥草道地性与环境因素和遗传因素的关系进行了探讨。 关键词：鱼腥草；萌发；基因片段克隆；种质资源； ISSR；遗传多样性 II 鱼腥草 HMGR 基因片段的克隆及种质亲缘关系的 ISSR 分析 Abstract HERBA HOUTTYNIAE, the whole plant of Houttuynia cordata Thunb., is a kind of traditional Chinese medicine and also a kind of delicious vegetable. It is the raw material resources of Yuxingcao injecting liquid. In current time, pharmacological experiments had proved that it had the function of antibacteria, anti-virus and diuresis, and could enhance body immunity. This thesis reviewed the research status of Houttuynia cordata. The active ingredients、 pharmacological action and clinical application were analyzed and summarized. The results indicated that its biological activities were high; its effects were positive and worth being further popularized, but basic research should be conducted to develop new herbal preparation