乌骨藤注射液对Bel-7402细胞增殖及血管生成作用实验研究.pdf

张锐乌骨藤注射液对Bel．7402细胞增殖及血管生成的实验研究 的实验研究 研究生：张锐 导师：崔永安教授 中文摘要 1．目的： 近年来，抗肿瘤血管生成已成为肿瘤治疗的基础和临床研究热点，是最有希望 的肿瘤导向治疗靶标，与传统的肿瘤治疗相比，抗肿瘤血管生成治疗的最大特点 在于它不但具有良好的特异性，而且克服了药物达到肿瘤组织的不足和肿瘤耐药 性等问题。我国的中医药治疗与血管生成相关的病症有着悠久的历史，具有不同 于西医的特殊性，并在这些病症的治疗上有极大的优势。因此，研究中药抗肿瘤血 管生成，在阐明中医基础理论、临床治疗及中药研究中具有十分重要的意义。 乌骨藤，又叫通光藤，为萝蘑科牛奶菜属植物，主产于云南、贵州，据记载：该 药始载于《滇南本草》，性味苦，微甘、凉，入肺胃膀胱经；具有止咳平喘、消炎镇 痛、通乳利尿等功效，用于治疗慢性支气管炎。民间用乌骨藤治疗癌症获得良效， 引起广大医药工作者的关注。本试验旨在研究并证明传统中药乌骨藤抗肿瘤活性， 从血管内皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、基质金属蛋白酶．2以及抑癌基 因p53等角度探讨乌骨藤的抗肿瘤作用机制。 2．方法： 2．1 MTT法 采用四氮唑盐(MTT)还原法测定不同浓度的乌骨藤注射液的体外对人肝癌 2．2 PI单染法检测细胞凋亡和周期 扬州大学硕士论文 2 一 采用流式细胞术检测不同浓度的乌骨藤注射液对人肝癌细胞Bel．7402凋亡和 周期的影响。 2．3 ELASI法 时间段表达VEGF的影响。 2．4免疫细胞化学法 采用细胞免疫化学S-P染色法检测不同浓度的乌骨藤注射液作用于人肝癌细 胞Bel．7402后b．FGF和MMP一2蛋白的阳性表达率。 2．5 流式细胞术检测抑癌基因p53蛋白的表达 采用流式细胞术，通过间接荧光标记法测定不同浓度的乌骨藤注射液作用于 强度／对照管细胞平均荧光强度。如FII．0为阳性表达，FI≤1．0为阴性表达。 3．结果： 3．1 Bel．7402均有抑制作用，且呈剂量时间依赖，经统计学分析有差异。 3．2 80mg／m1)作用后，细胞凋亡率明显上升，且呈剂量依赖，经统计学分析有意义。 然而，细胞周期变化不大，未证实细胞被阻滞于特定周期。 3．3 加，VEGF表达逐渐减少，且与阴性对照组相比均有统计学差异。 张锐乌骨藤注射液对Bel．7402细胞增殖及血管生成的实验研究 三 3．4 的表达均有所减少，经统计学分析有差异。 3．5 流式细胞免疫荧光检测p53蛋白的结果显示，随着药物浓度的增加，荧光强 度增加，p53峰总体向右偏移。根据FI计算公式计算出FI值，经不同浓度的乌 骨藤注射液作用24h后，p53均阳性表达，且FI值随剂量的增加而增高。 4．结论： 乌骨藤注射液体外具有较强的抗肿瘤作用，一方面乌骨藤注射液可以下调肿 另一方面，乌骨藤注射液可以激活p53基因的表达诱导肿瘤细胞的凋亡，且p53 的激活又可以抑制VEGF的表达，进一步阻断了肿瘤血管的生成。乌骨藤注射液 可能是通过诱导肿瘤细胞凋亡和阻断肿瘤血管生成与转移侵袭发挥抗肿瘤作用 的。 成纤维细胞生长因子；基质金属蛋白酶一2 扬州大学硕士论文 4 一 l ydutsno One ctofGlaucescent Experimentalstudy ‘ F。t Rootinect