日本鳗鲡组织器官抗菌肽分离与鉴定.pdfVIP

日本鳗鲡组织器官抗菌肽的分离与鉴定 摘要 养殖过程中病害时有发生，反复使用抗生素等化学药物防治疾病导致耐药致病菌株的出现 等一系列严重的问题，寻找天然、高效、广谱和细菌不易产生耐药性的药物来替代传统化 学药物是鱼病防治研究的重要方向之一。鱼类的非特异性免疫因子，尤其是抗茵肽，因其 天然性、抗菌谱广、抗菌活性强等诸多优点，且其作用机理主要是通过破坏细菌细胞膜， 导致细胞内含物外泄而杀灭细菌，细菌难以对其产生耐药性，因而有望替代传统抗生素类 药物，抗菌肽的研究已成为医药及分子免疫学的研究热点。本论文比较日本鳗鲡不同组织 器官的抗菌活性，并分析其抗菌活性组分，在此基础上选择抗菌活性较大的肝脏采用液相 色谱进行分离纯化，获得纯度较高的抗菌肽类物质。 1．鳗鲡不同组织器官抗菌活性比较及抗菌组分分析：用10％醋酸提取日本鳗鲡肝脏、 鳃、脾脏、胆汁、肾脏和血清中的抗菌活性物质，检测其对养殖鳗鲡常见的四种致病菌， 即肠杆菌Enterobacter sp．(B01)、迟缓爱德华氏菌EdwardsielIa 属Aeromona sp．(B18)和嗜水气单胞菌Aeromona 显示，肝脏、脾脏、胆汁和鳃的样品对四株试验菌株均有明显的抑菌作用，肾脏对B18、 的抗菌活性差异显著(p0．05)，按平均抑菌圈半径计算，其抗菌活性大体呈现为：肝脏 相高效液相色谱法分析上述各组织器官的醋酸提取物中的活性组分，结果显示：肝脏、脾 脏、胆汁和鳃样品中的活性组分(以杀伤指数大于50％计)主要集中于乙腈洗脱浓度为 究鳗鲡等鱼类抗菌活性组分提供重要的参考依据。 2．鳗鲡肝脏中抗菌肽的分离与鉴定：采用10kDa纤维柱切向流超滤10％醋酸提取日 的抑杀作用。结果显示，小分子蛋白(10kDa)抗菌活性大于大分子蛋白(≥10kDa部 分)抗茵活性，但是两部分抗茵活性无显著性差异(胗0．05)；同一部分样品对不同菌株抗 茵活性也各不相同，对B18菌的抑杀作用最强。对小于10kDa部分采用阳离子交换层析 和反相高效液相色谱层析等方法进一步层析得到分子量大约为2．5kDa电泳纯抗菌肽，杀 伤指数为99．4％，MALDI．TOF．MS质谱分析结果显示该抗菌物分子量在2．3kDa之间，说 明并非单一蛋白，有待于进一步分离。 关键词：日本鳗鲡，抗菌活性，抗菌肽，肝脏，分离，纯化 The andidentificationof purification from peptides Anguillajaponica Abstract et Japanese Temminck oneofthemost eels似nguillajaponica Schlegel)is important economicfreshwatercultivated in and speciesChifia．Nowadays，thehighdensity intensive ofeelsoftenresultsinbacterialdiseasesoutbreak．Inordertosavethe farming economic toCule sometime$havetousesomeantibioticsthe loss，farmers the of useantibioticsresultin bacterial the might producingdrug-resistantstrains，orrestricting