第二章菌种分离筛选.pptVIP

3、所有分离培养基中都应含有抗真菌剂(如放线菌酮和制霉素)，掺加浓度一般为50μg／m1， 以抑制真菌的生长。 4、琼脂平板在使用前应置于37℃培养箱中孵育l、2天。 5、培养基的生物物理学参数，如pH及盐分也应调节到与试样的生态系统参数值相近。 二、分离 目的微生物不纯，需分离纯化。采用简便迅速，有一定准确性的检出方法，提高筛选效率。常用平皿反应法： 纸片培养显色法：浸有指示剂滤纸。 透明圈法：混浊底物被分解后形成透明圈。如可溶性淀粉、碳酸钙等。变色圈法：直接用显色剂或指示剂。生长圈法：利用某些具有特殊营养要求的微生物作为工具菌，要分离的微生物能在一般培养条件下生长而合成该营养物而使工具菌能生长，形成生长圈。抑制圈法：琼脂块培养法。 用刚果红染色法鉴定筛选降解纤维素的菌株 羧甲基纤维素钠作培养物 抗生素筛选 检定菌培养，加上发酵液 五、放线菌的分离培养基的组成原则 大多数放线菌的分离培养是在贫脊或复杂底物的琼脂平板上进行的。除嗜温性放线菌外，其他放线菌一般在培养4-20天内在分离平板上缓慢形成菌落。 在放线菌分离琼脂中通常都加入抗真菌剂制霉菌素或放线菌酮，以抑制真菌的繁殖。 选择性地添加抗生素。 分离琼脂平板制备好后，一般皆应在37℃培养箱中存放3天。 放线菌的分离 土样中放线菌的非选择性分离：土样风干，磨碎，无菌海绵压印土样后压印平板后培养。 植物体上放线菌的分离：无菌取植物组织，干燥以减少细菌数量，剪碎植物材料后植入平板表层后培养。也可洗下微生物后振荡培养。 水中放线菌的分离： 为使所要分离的放线菌的数量种类增多，一般将水样离心或滤纸过滤，取离心沉积或滤纸表面沉积进行系列稀释和涂布。 次代培养及纯化 菌落形成后可根据肉眼可见的菌落形态上的差异，作初步的鉴定和区分。 通过高倍放大进行镜检，可了解气生和营养孢子形成情况。 成功地分离出各种不同的放线菌属及种的关键是所采集样本的本身及其分离用的琼脂培养基；而肉眼识别不同的生长形态、从而初步地加以鉴定，在分离放线菌时显得尤为重要。 将分离平板上所形成的菌落用经火焰灼烧灭菌的钩形针或无菌牙签挑取，点接到琼脂平板上进行影印培养，以进一步筛选和分离。 放线菌菌落形态 六、真菌分离 1、利用低碳／氮比的培养基可使真菌生长菌落分散，利于计数，分离和鉴定。这里主要是利用营养成分的减少而使生长减慢，并由此限制真菌的迁徙生长。 2、改变培养温度将有利于不同嗜温区真菌的分离。 3、有时，真菌子实体形成必须有光线，这在分离培养时应加以考虑。 4、选择性富集：是通过一定的方式使样本中一种或一群微生物数量上的增加而利于分离的一种技术。 富集可以是种水平的，如通过营养要求的改变来富集分离镰刀菌；也可以是组成群水平的，如以纤维素为唯一碳源的选择性培养基可选择性富集所有能降解纤维素的纤维素裂解微生物。 5、在分离培养基中加入一定的抗生素即可有效地抑制细菌生长及菌落形成。 真菌的分离方法 土中真菌的分离：稀释法，混入法，压贴法，粘附法，，土过筛法，庶糖密度梯度离心法。 植物材料中真菌的分离：植入法，压贴法，洗涤法，浸泡法。 水中真菌的分离：水样稀释后涂布分离。饵诱技术常用于水中真菌的富集。 子实体直接分离培养担子菌：新采集的子实体组织植入平板内或在放于液体培养基表面放一小块无菌滤纸上培养。 微生物菌种分离实例 分解纤维素的微生物的分离 实验目的 从土壤中分离能分解纤维素的微生物,纯化得到1-5株菌.并通过此次实验,培养以下三方面的能力: 1.基本技术训练：在目前专业课程学习基础上进一步练习培养基的配制，干湿热灭菌，以及微生物分离纯化技术。 2.初步的科研训练：练习科研过程中查阅资料、设计实验方案、动手实施方案、综合安排实验、解决临时实际困难等方面的基本能力，认识科研程序，感受科研乐趣和困难。 3.培养实事求是的工作作风，科学严谨的工作态度。 实验原理 纤维素与纤维素酶 纤维素酶是一种复合酶，一般认为至少包含三部分，C1,Cx,和葡萄糖苷酶组成。前两种使纤维素分解成纤维二糖，第三种将纤维二糖分解成葡萄糖，正是在这三种酶的协同作用下，纤维素最终被分解成葡萄糖，为微生物的生长提供营养。 纤维素分解菌的筛选 纤维素-刚果红混合培养基 刚果红染色法 常用的刚果红染色法有两种：一是先培养微生物，再加入刚果红进行颜色反应，二是倒平板时就加刚果红。 方法一是传统的方法，缺点是操作繁琐，加入刚果红溶液会使菌落之间发生混杂；其优点是这样显示出的颜色反应基本上是纤维素分解菌的作用。 方法二的优点是操作简便，不存在菌落混杂问题，缺点是由于实验材料和琼脂都含有淀粉类物质，可以使能够产生淀粉酶的微生物出现假阳性反应。但这种只产生淀粉酶的微生物产生的透明圈较为模糊,无明显影响.方