HGPRT基因突变试验和SOS%2fumu显色试验在饮水消毒副产物遗传毒性风险评价中的应用研究.docVIP

华 中 科 技 大 学 博 士 学 位 论 文 HGPRT 基因突变试验和 SOS/umu 显色试验在饮水消毒 副产物遗传毒性风险评价中的应用研究 博士生：张绍慧  导  师：鲁文清 教授  华中科技大学同济医学院公共卫生学院劳动卫生与环境卫生学系 教育部环境与健康重点实验室  摘  要  饮用水经消毒处理后产生大量消毒副产物，研究表明一些饮用水消毒副产物 （DBPs）具有遗传毒性和/或致癌性，是影响饮水安全的重要因素。饮用水中 DBPs 成分繁多，均以混合暴露的形式作用于人体，且生物学效应远较单一物质复杂。运用 长期动物致癌性试验及相应的人群流行病学调查等评价方法来判断 DBPs 混合暴露对 健康的影响受到现有技术手段限制还存在诸多困难。因此，构建一套由多种短期遗传 毒理学试验组成的检测体系，对饮用水中 DBPs 混合暴露的遗传毒性效应进行安全性 评价具有重要现实意义。 目的: 应用 HGPRT（次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶）基因突变试验和 SOS/umu 显色 试验，对饮用水中具有遗传毒性或致癌性的 13 种 DBPs 的遗传毒性进行分析和验证， 应用微板法对 DBPs 致靶细胞的细胞毒性进行研究，评价 DBPs 的细胞毒性与遗传毒 性之间的关系，丰富该 13 种 DBPs 的毒理学资料。应用上述遗传毒理学试验方法，对 加氯消毒前后的水样提取物的致突变性和遗传毒性特征进行分析和评价，探讨哺乳动 物细胞 HGPRT 基因突变试验及 SOS/umu 试验在饮用水安全性评价中应用的可行性， 为将其纳入到饮水安全性评价体系的合理性提供实验依据。 方法： 3 华 中 科 技 大 学 博 士 学 位 论 文 （1）应用微板法细胞毒性试验检测 13 种 DBPs 致中国仓鼠卵巢细胞 CHO 及沙 门氏菌的细胞毒性。以多剂量水平的 DBPs 进行染毒，CHO 细胞染毒时间为 72 小时， 沙门氏菌染毒 2 小时，结束后检测吸光度值，计算相对阴性对照的 CHO 细胞或沙门 氏菌的生存率。曲线拟合后，计算细胞毒性潜力值。应用 HGPRT 基因突变试验分析 13 种 DBPs 诱发 CHO 细胞基因突变的能力，每种 DBPs 均设四个染毒剂量、同时设 一个阴性对照和一个阳性对照，染毒时间为 4 小时。绘制剂量-反应关系曲线，以斜率 做为遗传毒性潜力值。应用 SOS/umu 显色试验检测 13 种 DBPs 对沙门氏菌 DNA 的 损伤能力，每种 DBPs 均设立多水平的染毒剂量，染毒时间为 2 小时。以酶活性诱导 比值超过 2 作为判定 DBPs 为遗传毒性阳性的标准，经曲线拟合后计算遗传毒性潜力， 以此比较 13 种 DPBs 遗传毒性的强弱。 （2）分别采集 1、5 及 7 月武汉市某水厂以汉江水为水源的原水、消毒处理后的 出厂水及管网末梢水，水样酸化 (pH=2) 后，以 XAD-2 大孔树脂提取水样有机污染 物。在 CHO/HGPRT 试验中，水样有机提取物设四个染毒剂量，分别相当于 1.2、6、 30 及 150ml 水样/ml 培养液，染毒时间为 24 小时。而 SOS/umu 显色试验的染毒剂量 范围则相当于 1-2000ml 水样/ml 培养液，染毒时间为 2 小时。通过 HGPRT 基因突变 频率的改变及计算 SOS/umu 的遗传毒性潜力值评价水样有机提取物遗传毒性的强弱。 结果： （1）根据细胞毒性潜力值的大小，13 种 DBPs 致 CHO 细胞毒性强弱的排序为： 二溴乙腈（DBN） 碘乙酸（IA） 溴氯乙腈（BCN） 溴乙酸（BA） 3-氯-4-（二 氯甲基）-5 羟基-2（5 氢）-呋喃酮（MX） 二氯乙腈（DCN） 氯乙腈（CN） 三 氯乙腈（TCN） 二溴乙酸（DBA） 氯乙酸（CA） 水合氯醛（CH） 二氯乙酸 （DCA） 三氯乙酸（TCA）。13 种 DBPs 中有 9 种可明显诱导 CHO 细胞的 HGPRT 基因突变，它们对 CHO 细胞的遗传毒性潜力排序为：MX DBN IA DBA DCN TCN BA CA DCA，有 4 种 DBPs 包括 BCN、CN、CH 和 TCA，在 CHO/HGPRT 试验中未检测到致突变作用。 （2）13 种 DBPs 致沙门氏菌细胞毒性强弱的排序为 MX IA DBN BCN BA TCN DCN CA DCA DBA CN TCA CH。13 种 DBPs 中有 8 种可明显诱 4 华 中 科 技 大 学 博 士 学 位 论 文 导沙门氏菌的 SOS 反应，它们对沙门氏菌的遗传毒性大小排序为：MX DBN IA BCN BA TCN DBA DCA，有 5 种 DBPs 包括 CN、DCN、C