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第1章 预处理技术 一.生化分离过程的工艺流程： 二.发酵液的预处理技术： 二.发酵液的预处理技术： 二.发酵液的预处理技术： 三.凝聚和絮凝技术 常用的凝聚剂 Al2(SO4)3.18H2O，AlCl3.6H2O，FeCl3， ZnSO4，MgCl2 阳离子对负电荷的胶粒凝聚能力次序为： Al3+Fe3+H+Ca2+Mg2+K+Na+Li+ 絮凝剂是一种能溶于水的高分子聚合物，其相对分子质量可高达数万至一千万以上，长链状结构，其链节上含有许多活性官能团，包括带电荷的阴离子（如---COOH）或阳离子（如---NH2）基团以及不带电荷的非离子型基团。 它们通过静电引力、范德华引力或氢键的作用，强烈地吸附在胶粒的表面。当一个高分子聚合物的许多链节分别吸附在不同的胶粒表面上，产生桥架连接时，就形成了较大的絮团，这就是絮凝作用。 絮凝原理 絮凝作用的影响因素： 常用絮凝剂的种类： 四 杂蛋白的去除 等电点沉淀 蛋白质一般以胶体状态存在于发酵液中。胶体粒子的稳定性和其所带电荷有关。 蛋白质在某一pH下，净电荷为零，溶解度最小，称为等电点。因为羧基的电离度比氨基大，故蛋白质的酸性性质通常强于碱性，因而很多蛋白质的等电点都在酸性范围内（pH 4.0－5.5）。 四 杂蛋白的去除 变性沉淀 蛋白质从有规则排列变为不规则结构的过程称为变性。 ①加热：在链霉素生产中，在pH3.0时，加热至70～75℃，维持30min，黏度降为1/6，过滤速度提高3倍。 ②加有机溶剂、表面活性剂、酸碱等。 四 杂蛋白的去除 在酸性溶液中，蛋白质能与一些阴离子如三氯乙酸盐、水杨酸盐、钨酸盐、苦味酸盐、鞣酸盐、过氯酸盐等形成沉淀； 在碱性溶液中，能与一些阳离子，如Ag＋，Cu2＋，Zn2＋，Fe2＋和Pb2＋等形成沉淀。 变性蛋白质溶解度较小。最常用的使蛋白质变性的方法是加热。加热还能使液体粘度降低，加快过滤速度。该法只适用于对热较稳定的生化物质。 四 杂蛋白的去除 吸附 在发酵液中加入一些反应剂，相互反应后生成的沉淀物可吸附蛋白质而使其沉淀。如在四环素发酵液中加入黄血盐和硫酸锌，两者反应生成K2Zn3[Fe(CN)6]2 在枯草杆菌的碱性蛋白酶发酵液中加入氯化钙和磷酸盐等 五 不溶性多糖的去除 当发酵液中含有较多不溶性多糖时，黏度增大，固液分离困难，可用酶将其转化为单糖。 六 高价无机离子的去除 除去Ca2＋——草酸钠 Mg2＋ ——草酸根（草酸镁溶解度稍大）或磷酸盐 Fe2＋ ——黄血盐（生成普鲁士兰沉淀） 七.发酵液的固液分离 固液分离方法 过滤 过滤 过滤的常用设备： 分离实例 乳酸发酵液预处理 分离实例 透明质酸发酵液预处理 保证絮凝效果最佳 碱化 80℃保温3min 发酵液 变性去除杂蛋白 加适量CaCO3 调节 pH4.0 壳聚糖50mg/m3 于30℃搅拌5min 加硅藻土作助滤剂，板框过滤 滤液 活性炭 脱色 过滤， 取虑液 浓缩 （蒸发、 膜分离） 结晶 （降温至 5~10℃） 洗涤、 酸解、 脱色、 过滤 成品 * * 重点：预处理的作用及常用方法 凝聚与絮凝的原理及异同点 杂蛋白、高价无机离子的去除方法 悬浮液的基本特性 ①细胞的相对密度与培养液相似 ②可压缩性，粘稠，非牛顿流体，流变行为复杂 ③悬浮状态稳定 ①改善发酵液的物理性质：流变性质、颗粒粒度 预处理的目的 ②去除部分杂质：杂蛋白、多糖、高价无机离子等 ①物理性质的改善 ②杂质的去除 预处理的方法 加热（降低黏度、去除杂蛋白） 凝聚与絮凝（增大粒度） 加助滤剂（改善过滤） 去杂蛋白（等电点、变性剂、吸附） 去多糖（酶解） 去离子（沉淀） 凝聚和絮凝技术能有效地改变细胞、菌体和蛋白质等胶体粒子的分散状态，使聚集起来，增大体积，以便于过滤，常用于菌体细小而且粘度大的发酵液的预处理中。 凝聚是在高价无机盐作用下，由于经典排斥力的降低，而使胶体体系不稳定的现象。 絮凝是指在某些高分子絮凝剂存在下，基于架桥作用，使胶粒形成粗大的絮凝团的过程，是一种以物理的集合为主的过程。 凝聚和絮凝的概念 絮凝 絮凝剂用量:絮凝效果呈钟形变化。 溶液的pH：pH主要影响离子型絮凝剂中功能团的电离度，从而影响了分子链的伸展状态，改变了架桥能力。 搅拌速度和时间： 助滤剂：添加助滤剂能增加絮凝效果。 1.聚丙烯酰胺（Polyacrylamide）衍生物： 非离子型、阴离子型（含-COOH）、阳离子型（含-NH2） 由于聚丙烯酰胺类絮凝剂具有用量少，一般以ppm计量，絮凝体粗大，分离效果好，絮凝速度快以及种类多等优