三七病程相关蛋白1基因的克隆与表达分析_李瑞博.docVIP

?  124 ?  药学学报 Acta Pharmaceutica Sinica 2014, 49 (1): 124?130 三七病程相关蛋白 1 基因的克隆与表达分析 李瑞博 1, 2,崔秀明 2,刘玉忠 1,吴志刚 1,林淑芳 1,申 业 1*,黄璐琦 1*  (1. 中国中医科学院中药资源中心, 北京 100070;  2. 昆明理工大学生命科学与技术学院, 云南 昆明 650000)  摘要: 在生物信息学分析基础上, 采用逆转录聚合酶链式反应 (RT-PCR) 方法从三七中获得病程相关蛋白 1 (pathogensis-related protein 1, PR1) 基因的开放阅读框, 命名为 PnPR1, 测序结果显示该序列长 501 bp, 编码 166 个氨基酸, 其蛋白质分子质量为 18.1 kD。利用 NCBI/Blastp 和 BioEdit 软件进行同源性比对显示, PnPR1 基因编 码蛋白与葡萄、烟草、番茄等高等植物中的 PR1 蛋白同源性较高, 且具有相同的富含半胱氨酸蛋白的保守结构 域。将构建的重组载体 pET28a(+)-PnPR1 在宿主菌 Escherichia coli BL21 中经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷 (IPTG) 诱导表达融合蛋白, 在不同诱导时间、诱导温度、IPTG 诱导浓度和 IPTG 添加时间下对诱导条件进行优化。十 二烷基硫酸钠?聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS) 分析结果表明, PnPR1 基因编码蛋白的最佳诱导条件为: IPTG 终浓度 0.4 mmol·L?1、IPTG 添加时间为转接后 4 h、诱导温度 28 ℃、诱导时间 20 h。这为蛋白纯化及单克隆抗 体的制备奠定了一定的基础。 关键词: 三七; 病程相关蛋白; 生物信息学分析; 原核表达; 条件优化 中图分类号: R931 文献标识码: A 文章编号: 0513-4870 (2014) 01-0124-07  Cloning and expression analysis of pathogenesis-related protein 1 gene of Panax notoginseng LI Rui-bo1, 2, CUI Xiu-ming2, LIU Yu-zhong1, WU Zhi-gang1, LIN Shu-fang1, SHEN Ye1*, HUANG Lu-qi1* (1. National Resource Center for Chinese Materia Medica of China Academy of Chinese Medical Sciences, Beijing 100070, China; 2. Faculty of Life Science and Technology, Kunming University of Science and Technology, Kunming 650000, China)? Abstract: By reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR), an open reading frame of pathogenesis-related protein 1 (PR1) was isolated from Panax notoginseng and named as PnPR1. Molecular and bioinformatic analyses of PnPR1 revealed that an open reading frame of 501 bp was predicted to encode a 166-amino acid protein with a deduced molecular mass of 18.1 kD. Homology analysis showed that the deduced amino acid sequence of PR1 protein of Panax notoginseng had a high similarity with other higher plants had the same conservative structure domain of cysteine-rich secretory protein (CAP). The recombinant expressed plasmid pET28a(+)-PnPR1 was expressed in Escherichia coli BL21. The expression conditions were optimi