瑟伯氏棉TIR_NBS_LRR类蛋白质编码基因的克隆与分析_杨晓杰.docVIP

1228  江苏农业学报（ Jiangsu J． of Agr． Sci． ） ，2013，29（ 6） ： 1228 ～ 1235 h ttp： / / w w w． js n y x b ． c o m  杨晓杰，赵付安，唐中杰，等． 瑟伯氏棉 TIＲ-NBS-LＲＲ 类蛋白质编码基因的克隆与分析［J］． 江苏农业学报，2013，29 （ 6 ） ： 1228- 1235． doi： 10． 3969 / j． issn． 1000-4440． 2013． 06． 008 瑟伯氏棉 TIＲ-NBS-LＲＲ 类蛋白质编码基因的克隆与 分析  1， 1 1  1 1 1  1  （ 1． 河南省农业科学院经济作物研究所，河南 郑州 450002； 2． 棉花生物学国家重点实验室，中国农业科学院棉花研究所，河 南 安阳 455000）  摘要：  以对抗黄萎病种质瑟伯氏棉接菌前后高调表达的 3 个 TIＲ-NBS-LＲＲ 类蛋白质点为出发点，根据其对 应同源蛋白质 B3V7Ｒ2（ 烟草） 、B9INW6（ 棉白杨） 和 Q19EF1（ 拟南芥） ，利用 BLAST 在线搜索棉花中对应的表达序 列标签（ EST） ，分别设计引物，对接菌后的瑟伯氏棉进行 ＲT-PCＲ 扩增，进而以获得的 EST 序列为母序列，通过电子 克隆及 ＲACE 技术，克隆了 3 个 编 码 TIＲ-NBS-LＲＲ 类 蛋 白 质 的 候 选 基 因。生 物 信 息 学 分 析 结 果 表 明，3 个 候 选 TIＲ-NBS-LＲＲ 类蛋白质编码基因均具有典型的 TIＲ、NBS 及 LＲＲ 功能域； 系统进化分析结果显示，3 个候选基因在 瑟伯氏棉抗黄萎病机制中可能起重要作用。 关键词： 瑟伯氏棉； 黄萎病； TIＲ-NBＲ-LＲＲ 蛋白质编码基因； 克隆与分析 中图分类号： S562 文献标识码： A 文章编号： 1000-4440（ 2013） 06-1228-08  Cloning and analysis of genes encoding TIＲ-NBS-LＲＲ-like proteins in Gossipium thurberi YANG Xiao-jie 1 ，2 ， ZHAO Fu-an 1 ， TANG Zhong-jie 1 ， LI Wu 1 ， ZHAO Yuan-ming 1 ， XIE De-yi1 ， FANG Wei-ping 1 （ 1． Industrial Crops Ｒesearch Institute，Henan Academy of Agricultural Sciences，Zhengzhou 450002，China； 2． State Key Laboratory of Cotton Biology， Institute of Cotton Ｒesearch，Chinese Academy of Agricultural Sciences，Anyang 455000，China）  Abstract：  Based on Proteins B3 V7 Ｒ2 in Nicotiana tabacum ，B9 INW6 in Populus trichocarpa and Q19 EF1 in Arabidopsis thaliana，homologous with the three TIＲ-NBS-LＲＲ-type protein spots in Gossipium thurberi which were up- regulated after the inoculation with Verticillium dahliae，the corresponding expressed sequence tags （ ESTs ） of G． thurberi were found by BLAST，and three novel TIＲ-NBS-LＲＲ-like candidate genes was cloned from G． thurberi after V． dahliae inoculation by silico cloning and rapid amplification of cDNA ends （ ＲACE ） ． Bioinformatics analysis re- vealed that all the three candidate genes possessed the typical functional domains includin