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第二章 色谱法的基本参数及理论 一、色谱分离与保留作用 色谱的保留作用：在色谱系统中，当样品混合物被流动相带入柱内后，便在固定相与流动相之间不断地进行分配平衡。不同的化合物由于他们之间理化性质的差异，在两相中存在量的比值也各不相同。固定相中存在量多的化合物，冲出柱子所需消耗流动相的量就多，较慢地被从色谱柱中被洗脱出来。流动相中存在的比例大的化合物，冲洗出柱子所需消耗流动相的量就少，较快地被从色谱柱中被洗脱出来。这种现象就称为色谱的保留作用。 图 2-1 色谱分离示意图 样品组分在两相间分配平衡时，其在两相中存在量的比值称为容量因子(capacity factor) k’，又称分配比（partion ratio）或分配容量。 k’ = 式中，Ms：组分在固定相中的量，MM：组分在流动相中的量。在固定相中的量为零的化合物，其k’=0，这些组分被称为在该色谱条件下的非保留物质。容量因子（分配比）可通过实验计算：k’ = 。即k’为组分在固定相中消耗的时间与其在流动相中消耗的时间之比。 样品组分在两相中分配平衡时，其在固定相和流动相中的浓度比称为分配系数（partion factor），分配系数以K表示。其公式如下： K = = k’· 式中，Ms/Vs为样品组分在固定相中的浓度，Mm/Vm为样品组分在流动相中的浓度。 分配系数大的组分保留时间长（色谱的保留作用强），分配系数小的组分保留时间短（色谱的保留作用弱）。 K = k’· = k’· β 式中β = 称为相比率，即色谱柱中流动相体积与固定相体积之比。例在毛细管GC中壁涂空心柱的相比为： β = = = 式中r为毛细管柱横截面的半径，df为柱内壁固定液的膜厚。 二、保留值 保留时间与保留体积 保留时间（tR）：从进样到柱后出现浓度最大值所需的时间。 保留体积（VR）：从进样到柱后出现浓度最大值所需消耗流动相的体积。 VR = tR·Fc (Fc为流动相的流速) 实验中Fc值的求法： HPLC直接从仪器读取 GC采用皂膜流量计在柱后测得 死时间（tM）和死体积（VM） t M：不保留物质从进样开始到柱后出现浓度最大值所需时间。 VM：不保留物质从进样开始到柱后出现浓度最大值所需消耗流动相的体积。 在以甲醇-水系统为流动相的反相HPLC中，甲醇峰的保留时间可近似看作死时间。在GC中，空气峰（GC-ECD中）的保留时间和甲烷峰（GC-FID中）的保留时间可近似看作死时间。 GC中tM的准确求算方法： tM = 式中tR（n+i）、tR（n）、tR（n-i）为同系物（如正构烷烃）中间隔碳原子数相等的组分的保留时间。 Cn – Cn-i = Cn+i – Cn HPLC中tM的测法： 将流动相中溶剂峰峰的保留时间可近似看作死时间。 调整保留时间（tR’）和调整保留体积（VR’） tR’为扣除死时间的保留值tR’ = tR - tM VR’ = VR – VM k’ = tR’/ tM 相对保留值（relative retention volume） 相对保留值γ1,2为被测组分的调整保留时间tR’1与标准物的调整保留时间tR’2之比。其公式如下： γ1,2 = = = = （k’ = tR’/ tM） 式中脚注号1表示被测物，2表示标准物。 采用相对保留值，是为了消除某些操作条件，如流速和固定液流失等对保留值的影响。相对保留值中标准物可以是被测样品中的某一组分，也可以是人为地加入的某一化合物。γ1,2仅为柱温、固定液性质的函数，而与其他实验条件无关。γ1,2作为定性指标的缺点是标准物不统一，其数值随标准物的不同而不同。 保留指数（用于GC） 保留指数（retention index）又称为柯瓦指数（Kovats index），是使用最广泛并被国际上公认的定性指标，它具有重现性好（精度可达±0.1指数单位），标准物统一及温度系数小等优点。鉴于相对保留值存在标准物不统一，测量精度不够高等问题。Kovats提出了统一用正构烷烃系列作为标准物。把保留指数定义为： I x = 100 + 100N 式中：I x为被测物的保留指数 tR’x为被测物的调整保留时间 N为正构烷烃的碳原子数，如正己烷的N = 6 tR’N及tR’（N+1）分别为具有N个碳原子及（N+1）个碳原子的正构烷烃的调整保留时间。 （1）保留指数的定义及公式来源 保留指数：I（国际公认，用于GC中鉴定，定性），相对值，用一系列正构烷烃为基准物。令正构烷烃的保留指数为I = 100N（