人胸腺基质淋巴细胞生成素在母-胎界面的表达及其在母-胎免疫耐受中的调节作用.pdf

hTSLP在母．胎界面的表达及其 在母．胎免疫耐受中的调节作用 博士研究生 郭培奋 导 师 李大金 中文摘要 生理妊娠类似于同种移植，作为同种移植物的胚胎在母体存活直至分娩，实际上 反映母体对胚胎的免疫耐受；母体对胚胎的免疫排斥将导致妊娠失败。揭示母．胎免 疫耐受的确切机制，对人类自然流产等妊娠疾患的防治具有重要意义；并对移植免疫 学和肿瘤免疫学的研究将产生重要的推动作用。 母．胎界面主要包括滋养细胞、蜕膜基质细胞、蜕膜腺上皮细胞以及免疫细胞。 多年来人们从不同的角度研究母．胎界面发生的生物学事件，以阐述母．胎免疫调节的 机制，其中包括母．胎界面Th2型免疫优势的形成，及调节性T细胞(Treg)数量与 功能的变化。胸腺基质淋巴细胞生成素(hTSLP)是一种造血细胞因子，诱导炎症局 部形成Th2型优势，参与过敏性疾病的发病。不仅如此，正常人胸腺Hassall’S小体 界面是否具有胸腺类似的免疫调节功能，迄今尚不得而知。 第一部分hTSLP在人母．胎界面的表达及其调控 目的分析入胸腺基质淋巴细胞生成素在母．胎界面的表达特征及其调控。 方法收集早孕期正常或不明原因自然流产的绒毛与蜕膜组织，采用RT-PCR、 Blot、ELISA法检测母．胎界面TSLP的 实时定量PCR、免疫组织／细胞化学、Western 表达特征，并比较hTSLP在正常早孕与流产之间的差别。对滋养细胞进行多种干预， 结果RT-PCR法分析发现，绒毛与蜕膜组织及非孕妇女子富内膜均转录TSLP mRNA。免疫化学法分析显示，早孕绒毛外层的合体滋养细胞、内层的细胞滋养细胞 (DSCs)不表达之。1 mRNA转 水平为19．30pg／柚。绒毛与蜕膜组织及培养的原代细胞，正常早孕的TSLP 录与蛋白表达均明显高于自然流产组，提示TSLP参与人正常妊娠的维持。 mRNA的表达；而三 单独孕酮、1713．E2或B-hCO并未显著促进滋养细胞TSLP 者联合处理人Tros时，TSLPmRNA较未处理组升高9—12倍，培养上清中1’sLP水 mRNA水平升近2倍：而rhTSLP 平升高至28．23pg／ml。n心吨与儿_4联合作用使TSLP 处理Tros，TSLPmRNA表达水平无显著升高。 结论人母．胎界面表达TSLP，滋养细胞是其主要来源；正常早孕Tros表达水 平显著高于不明原因自然流产患者。联合使用孕酮、1713．E2与p-hCG显著促进Tros 转录TSLPmRNA，并促进Tros分泌TSLP。 第二部分滋养细胞通过自分泌TSLP促进其增殖与侵袭 目的分析rhTSLP对人滋养细胞生物学行为的影响。 方法免疫化学法检测原代滋养细胞是否表达TSLP受体。不同浓度rhTSLP作 kit分析滋养细胞增殖 用于原代滋养细胞48h后，采用[3明州dille摄取法及CCK8 能力；采用transwell实验分析滋养细胞侵袭能力。 结果免疫化学法检测到滋养细胞表达TSLP受体。外源TSLP能够促进原代滋 侵袭。 结论滋养细胞通过自分泌TSLP，促进自我增殖与侵袭，增强滋养细胞的生物 活性；这将有利于妊娠的维持。 第三部分人滋养细胞分泌TSLP诱导母．胎界面Th2型免疫优势 目的 了解Tros能否通过分泌TsLP训导dDCs促进母．胎界面Th2型免疫优势。 方法流式细胞术检测蜕膜免疫活性细胞表面TSLP受体水平；以rhTSLP、LPS 与T-bet水平。 CCLl 7下降至对照组水平。rhTSLP或Tros培养上清处理dDCs24h后，dDCs与dClM+