不同浓度泌乳素对葡萄膜炎患者外周血淋巴细胞增殖及活化影响.pdfVIP

中文摘要 前 言 \随着神经内分泌免疫学的建立，近年来自身免疫病与神经内 分泌系统调节网络关系的研究主要集中在免疫增强类激素一泌乳 素(Prolactin,PRL)方面。基础研究证实:泌乳素可以增加淋巴细 胞鸟氨酸脱拔酶的活性，后者是免疫反应的始动步骤;淋巴细胞本 身也可分泌泌乳素样物质;T细胞、B细胞和单个核细胞表面有泌 乳素受体表达。泌乳素在内分泌、自分泌和旁分泌的水平上实现 对免疫系统的调节。 葡萄膜炎为眼科常见病，其病因及发病机制仍不完全清楚，视 网膜可溶性抗原(s-Ag)与完全弗氏佐剂所致的实验性自身免疫 性葡萄膜视网膜炎(ExperimentalAutoimmunUveoretinitis,EAU) 被公认为人类葡萄膜炎的动物模型，并证明S-Ag有很强的致葡 萄膜炎活性。近年来发现环抱霉素A是通过与泌乳素竞争泌乳 素受体来实现其免疫抑制作用的。临床上使用嗅隐停阻断泌乳素 治疗葡萄膜炎有一定疗效 。以上证据均提示象系统性红斑狼疮 和类风湿性关节炎等自身免疫 一样，泌乳素可能在葡萄膜炎的 发生发展中有重要作用，为 课题研究目的:1.测定葡萄膜炎患 者血清中的PRL水平以了解其与葡萄膜炎的关系。2.葡萄膜炎 患者的PBMC对S一Ag的反应。3.在S一Ag刺激下，研究不同浓 度PRL对体外培养的葡萄膜炎患者PBMC的增殖及活化的影响， 以探讨PRL在葡萄膜炎发病中的作用。 研究对象 钟例葡萄膜炎患者N·9oi,女_，例“1年龄JIE12-60竺,甚士 前葡萄膜炎12例，后葡萄膜炎及全葡萄膜炎a例，初友9例，复友 11例，3个月内未使用免疫抑制剂，所有病例均为急性期。病程最 短一周，最长20余年。研究对象详细资料见表1。 46例正常对照，男28例，女18例，年龄在21一55岁，无眼部 疾病及免疫内分泌系统疾病。其中进行活化和增殖检测6例，男 女各3例。 实验方法 1.血清泌乳素水平测定 所有患者及正常对照者抽取肘静脉血2毫升，1500转离心获 取血清，于一20℃保存待测。用化学发光法测定血清泌乳素水平。 2.PBMC的分离及培养 无菌操作采肘静脉血10毫升，利用标准的密度梯度离心法分 离获取单个核细胞，胎盼蓝染色计数细胞后将PBMC以3x105/孔 种于96孔细胞培养板上，每孔加人200微升含10%FBS的RP- M11640培养液。加人不同浓度的PRL;12.5,50,200,1000n岁rnl, 同时加人S-Ag(150W ml)，培养108小时。以只加培养液或 PHA(5Rg/ml)或S-Ag的孔作为对照。 3.S-Ag适宜浓度测定 随机取4例患者试以S-Ag浓度分别为50,100,150,200, 2501,岁ml,S-Ag以150N.g/rnl为最适浓度。 4.sH-TdR掺人实验检测细胞增殖 PBMC经过S-Ag刺激96小时后，每孔加人0.5两isH- TdR,12小时后收集细胞，加人5毫升闪烁液中，液闪仪测量1分 钟，以每分钟脉冲数作为细胞增殖活性，此实验每种条件设3孔细 胞平行比较取均值。 5.双标记免疫荧光染色流式检测淋巴细胞表面抗原 将培养后的淋巴细胞移至流式管(Falcon)中，调整细胞数为3 x105/管，每管同时加人:CD,-FITC,CD,-PE各10微升，每次 均设一标本加人小鼠的IgGI-FTTC作为非特异对照。40C避光孵 育30分钟，然后用冷PBS洗涤3次后，用0.3毫升PBA固定重 悬，4小时内上机检测，流式细胞仪检测分析CD3CDzs细胞百分 比。 实验结果 1.葡萄膜炎患者与正常对照者血清中PRL水平的比较无显 著差异(P0.05)。 2.PHA对葡萄膜炎和正常对照者的PBMC增殖活化的影响。 PHA为非特异刺激原能明显促进PBMC的增殖与活化，葡萄 膜炎患者与正常对照者PBMC在PHA作用下增殖活性和活化百 分数无统计学差异(P0.05)。 3.S-Ag对葡萄膜炎及正常对照PBMC增殖的影响 PBMC对S一