农杆菌介导棉花遗传转化及纯合株系的筛选论文.docVIP

摘 要 提高棉花自身利用土壤潜在磷的能力意义重大。本研究以 4 个优良的陆地棉品种 为受体，利用农杆菌介导的方法，将含有根特异表达启动子的 PhyA 基因转入胚性愈 伤组织和下胚轴，以期获得转植酸酶基因棉花材料，同时对课题组前期转化获得的转 PhyA 基因 T3 代 3 230 株材料进行 PCR 检测，筛选纯合株系，并进一步测定根系植酸 酶活性。获得主要结果如下： 1 2 3 用农杆菌侵染棉花胚性愈伤后，卡那霉素浓度、胚性愈伤组织生长状态、受体材 料的基因型等因素对目的基因的转化效率影响较大。本研究表明：卡那霉素的筛 选最佳浓度为 75 mg/L，且黄色疏松，处于活跃分裂状态的棉花胚性愈伤，有助 于提高转化效率，筛选出晋棉 14、陕 724 是两个优良的转基因受体材料。 利用优化的条件，以陆地棉品种晋棉 14、陕 724 的胚性愈伤组织为受体，用农杆 菌介导的方法，从农杆菌侵染后经过 6 个月获得了经 PCR 鉴定含 PhyA 基因的转 基因植株。以中棉所 18 的下胚轴为受体，用农杆菌介导的方法获得含 PhyA 基因 的抗性愈伤组织。 对前期转化获得的转 PhyA 基因 T3 代 3 230 株进行 PCR 检测，筛选得到 1 个转基 因纯合株系，进一步测定其植酸酶活性，结果表明，转基因 T3 单株根系分泌植酸 酶活性明显高于未转化的对照单株，是对照的 1.18-5.1