复合荧光染色法检测人类精子顶体反应和存活率的相关研究论文.docVIP

华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 复合荧光染色法检测人类精子顶体反应和 存活率的相关研究 华中科技大学同济医院生殖中心 硕士研究生 周定杰 导师 靳镭 中文摘要 目的：同时使用Hoechst 33258/FITC-Pisum sativum agglutinin (FITC-PSA)复合荧光 染色法检测精子顶体反应和存活率，以评价此染色法的有效性和临床应用价值。 材料方法：18名既往有生育史的男性提供新鲜精液标本。使用上游法收集标本中 的存活精子。Hoechst 33258加入标本染色10分钟，洗脱后涂片，吹干，再用FITC-PSA 染色30分钟。使用荧光显微镜观测结果。同时进行CTC金霉素染色法检测顶体完整率， 及伊红染色检测精子的存活率用以对照。实验中使用钙离子载体A23187诱发顶体反 应，比较使用钙离子载体A23187前后的顶体反应情况。 结果：观察到4种不同染色结果的精子：a)存活的顶体反应的精子，b）存活的顶 体完整的精子，c）死亡的顶体反应的精子，d) 死亡的顶体完整的精子。 Hoechst 33258染色的结果和伊红染色检测的精子活率结果具有显著相关性 （r=0.633,P0.01）。 FITC-PSA和CTC检测精子顶体完整率结果具有显著相关性（r=0.928, P0.001）。 Hoechst 33258/FITC-PSA复合染色可以发现钙离子载体A23187具有诱发顶体反 应的效果。 经钙离子载体A23187处理后存活的顶体完整的精子百分比显著降低(P0.01)，死 亡的顶体反应的精子和存活的顶体反应的精子百分比显著升高(P0.01,P0.05)。死亡 1 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 的顶体完整的精子百分比基本没有变化。 结论：Hoechst 33258/FITC-PSA复合染色能够简便有效的同时检测精子顶体反应 和活率。此复合染色法简便快捷，能够有效评价精子功能，具有临床应用价值。 关键词：荧光染色、精子功能检测、顶体反应、精子活率、FITC-PSA、Hoechst 33258 2 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 Evaluation of acrosome reaction and viability of human sperm by a new combination fluorescent dye method Abstract Reproductive Medicine Centre, Tongji hospital, Huazhong University of Science and Technology Master Degree candidate: Dingjie Zhou Supervisor: Lei Jin Objective: To evaluate the usefulness of the Hoechst 33258/FITC-Pisum sativum agglutinin (FITC-PSA) staining for simultaneous assessment of viability and acrosome reaction rate (%AR) of human sperm. Material and Methods: Fresh semen was collected from 18 fertile donors. We used motile sperm selected by the ”swim-up” procedure using modified HTF. Hoechst 33258 was added and co-incubated with sperm for 10 min. Samples were washed free of unbound stain and the sperm were mounted as smears on glass slides. After drying, sperms were incubated with FITC-PSA for 30 min. Sperm were examined by fluorescence microscopy. Also , CTC staining and vital staining with yellowish eosin were performed simultaneously. The correlation of %AR and viability were analyzed. Results: Four different staining patterns were observed and cl