上课用3、1菊花的组织培养(经典)1.pptVIP

资料分析一 1958年，美国科学家斯图尔德取胡萝卜韧皮部的一些细胞，在无菌环境中，利用人工配置的富含各种植物所需营养成分及激素的培养基,在适宜的温度、pH、光照等环境条件下进行培养，由于细胞分化而最终发育成完整的新植株，斯图尔德成功的在生物学界引起了很大的震动。此后多年，科学家和技术人员利用该项技术，将许多离体的小块植物组织进行了培养，并获得了成功。 一、植物组织培养的基本过程 资料3 思考：应该选取菊花的什么部位进行组织培养？为什么？ 通常选未开花植株的茎上部新萌生的侧枝，其原因是该处组织生长旺盛，生理状况好，容易诱导脱分化和再分化 MS培养基主要成分 大量元素：N、P、 S 、K、Ca、Mg、 微量元素：B、Mn、Cu、Zn、Fe、Mo、I、Co 有机物：甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素、蔗糖等 微生物培养基以有机营养为主。与微生物的培养不同，MS培养基则需提供大量无机营养，无机盐混合物包括植物生长必须的大量元素和微量元素两大类。 思考：你认为组织培养过程中，关键的步骤是什么？怎样控制？ 不同植物激素使用顺序 资料分析4 诱导菊花愈伤组织：在MS培养基中加入BA和IAA，质量浓度均为0.5mg/ml 诱导菊花丛芽:在MS培养基中加入BA和IAA， 质量浓度分别为2~3mg/ml和0.02~0.3mg/ml 诱导菊花生根：MS培养基各成分用量减半，并添加NAA或IAA，质量浓度均为0.1mg/ml 4、环境因素（菊花组培） pH=5.8 温度控制在18—22℃ 每日光照12h ◆随讲随练1◆ 某班级四个实验小组根据本科所学内容进行菊花组织培养实验，具体实验操作如下，请将操作过程中的不合理之处找出，并加以改正 第1小组选取刚刚开过花的菊花植株的茎的中部作为实验材料。第2小组培养基中的主要成分及配方为：碳源——牛肉膏；氮源——蛋白胨；无机盐——包含N、P、K、Fe、Zn、Ca等的大量元素和包含Mn、Mo、Mg、S、I、Co、 B、Cu、等的微量元素；特殊有机物——各种氨基酸、维生素、烟酸、肌醇等。培养几天后，第3小组发现其培养 基中出现瘤状海绵组织，为促进其生长，换至含有细胞分裂素的培养基中，并且每天用日光灯照射培养物24h。第4小组认为再分化过程一般先生根后生丛芽才有利于试管苗的生长，所以先用生长素＞细胞分裂素的培养基培养愈伤组织。第5小组培养的植物组织最终形成一团细胞，始终未出现再分化现象，小组成员认为是培养基中生长素过少所致。 1一个细胞或一块组织为什么能培养成完整植株？理论基础是什么？ 2为什么细胞具有全能性？ 3生物体内的细胞能表现出全能性吗？ 4什么是细胞分化？实质是什么？有什么特点？ 5.什么是愈伤组织？愈伤组织的细胞有什么特点？ 6.什么是脱分化、再分化？ 1配制培养基的 步骤 1）、配制MS培养基 2）、加琼脂 3）、加蔗糖 4）、加大量元素、微量元素、有机物、植物激素 5）、灭菌 2、外植体消毒： 1）用到什么溶液？有什么作用？ 2）为什么用酒精时要控制好时间 3）为什么用流水、无菌水进反复的清洗？ 3、接种 1）将消过毒的菊花茎段在哪切成小段？切多长？ 2）插入培养基的方向？接种量？ 3）整个过程怎样保证无菌操作？ 4、培养 1）场所 2）温度3）光照 5、移栽 1）移栽前应该怎么做？ 充分清洗根系表面的 培养基；对培养基质消毒3）使用无土栽培4）新移栽的幼苗在温室过度几天 2）到什么时候可以移到土壤中？ 6、栽培 每天观察记录 适时浇水、施肥，直至开花 三、影响植物组织培养的因素： 4、不同植物激素使用量 3、不同植物激素使用顺序 植物组织培养有那些优点？ 1不受生长季节限制地繁殖植物。2.不携带病毒。3.培养周期短。4.可短时间大量繁殖，用于拯救濒危植物。5.可诱导之分化成需要的器官，如根和芽。6.解决有些植物产种子少或无的难题。如将香蕉进行组培得到人工种以方便移种 结果分析与评价 （一）对接种操作中污染情况的分析 培养基是否灭菌，外植体是否消毒，接种操作是否做到无菌，使用器械后是否灼伤灭菌 （二）你培育出愈伤组织了吗？你培育出愈伤组织进一步分化出根和芽了吗 ？ （三）幼苗移栽到露地后 能够正常生长吗 ？ 生根幼苗移栽技术的关键是 1）清洗根系表面的 培养基不能伤及根系一般使用无土栽培的 方法2）培养基质要提前消毒 （四）看移栽是否合格： 可以统计成活率 课题延伸（略） 练习 1.答：植物组织培养所利用的植物材料体积小、抗性差，对培养条件的要求较高。用于植物组织培养的培养基同样适合于某些微生物的生长，如一些细菌、真菌等的生长。而培养物一旦受到微生物的污染，就会导致实验前功尽弃，因此要进行严格的无菌操作。 2.答：外植体的生理状态是成功进行组织