化学发光磁酶免疫分析法检测梅毒螺旋体抗体.pdfVIP

化学发光磁酶免疫分析法检测梅毒螺旋体抗体 中文摘要 梅毒是由苍白密螺旋体(Treponemapallidum，TP)感染引起的一种性传播疾病，传染 性极高。近年来，我国梅毒的发病率不断上升，危害极大，特别是对临床输血构成了严 重的威胁。血液样本的安全与否直接影响到人们的健康问题。因此，对于梅毒的预防及 其早期诊断工作显得尤为重要。目前，国内实验室多数用操作简单、成本低廉的非特异 性梅毒螺旋体血清学试验，如快速血浆反应素环状卡片试验(RPR)、性病研究实验室 试验(VDRL)等对梅毒进行常规筛选。对于梅毒的确认实验则采用特异性梅毒螺旋体 抗体血清学试验，包括梅毒螺旋体血球凝集试验(TPHA)、梅毒螺旋体明胶凝集试验 (TPPA)等。随着科学技术的不断进步，尤其是基因工程生产TP重组抗原技术的进步， 极大地推动了梅毒检测方法的发展。酶联免疫吸附实验(ELISA)，即以TP重组抗原包 被酶标板，双抗原夹心显色法检测梅毒螺旋体抗体己成为目前国内通用的诊断方法，但 该方法灵敏度仍有待于进一步提高。高灵敏度化学发光技术的推广应用，特别是与磁性 微粒联用建立的化学发光磁酶免疫分析法(MagneticEnzyme 化，发展前景很好，值得大力推广。 本研究是以新型磁性复合微粒，即本课题组自主研发的金磁微粒GoldMag回 HRP．TPl7、HRP．TP44．5、HRP．TP47)，于37℃，180rain，待形成抗 rpm，温育反应30 原．抗体．酶标抗原双抗原夹心复合物后，加入辣根过氧化物酶化学发光底物鲁米诺 发光检测仪捕捉发光信号，实现对血清中梅毒螺旋体抗体的高灵敏检测。首先对该方法 中各个反应条件进行优化，确定最佳工作条件，然后对建立的化学发光磁酶免疫分析法 检测梅毒螺旋体抗体方法进行评价，并与其它市售试剂盒进行了比较研究。 磁性复合微粒高效快捷的分离技术结合化学发光检测线性范围宽、灵敏度高的特 点，使得建立的检测方法呈现很好的结果。方阵实验最终确定TP抗原包被量在7 gtg／mg(210 评价，结果表明，4C与37℃放置6天的试剂，检测结果相当，稳定性很好；批内差 复10次检测，交异系数为5．42％，均达到了国家标准；建立TP抗体浓度与发光强度之 间的标准曲线，结果表明在0．25～4 例丙肝阳性血清(TP阴性)，阴性符合率均达到100％；通过与商品化化学发光试剂盒 对比，灵敏度可提高4倍。 实验结果表明，以金磁微粒为固相载体建立的化学发光磁酶免疫分析法检测梅毒螺 旋体抗体有着很高的灵敏度、很好的特异性及良好的线性范围，各项评价指标均可达到 国家相关要求，因此，其有着很好的应用前景，有望在医院、血站及其他临床检测领域 普及应用。 关键词 金磁微粒，化学发光磁酶免疫分析，梅毒螺旋体抗体，免疫检测 ChemiluminescenceIm for MagneticEnzyme munoassay Detectionof Antibodies Treponemapallidum Abstract isakindof diseasecaused hasac11romc Syphilis sexually byTreponemapallidum．It rate bacterialinfectionandremainsaworldwidehealthconcern．Theoverallof public incidenceofthe increase main toolof is