浙江大学生物化学实验甲定磷法测定RNA含量.pptVIP

定磷法测定RNA含量 1、原理 1、核酸的水解 定磷法测定RNA含量 2、定磷法的原理 a、比色法的测定原理 由于钼蓝的OD660值与溶液中的磷含量成正比，因此，如以磷含量为横坐标，OD660值为纵坐标，二者之间的关系应为直线。如下图： 定磷法测定RNA含量 未知样品磷含量的测定： 由未知样品的OD660值， 通过标准曲线，用作图 法即可知道未知样品的 磷含量，如右图所示： b、定磷法的特点： 定磷法测定时如用抗坏血酸作还原剂，比色的最适范围为1-10微克无机磷。 钼蓝反应极为灵敏，微量杂质的磷、硅酸盐、铁离子、以及酸度偏高偏低均会影响测定结果。 定磷法测定RNA含量 3、RNA含量的测定原理 由于RNA的含磷量为9.5%，因此，将测得的含磷量乘以100/9.5即为RNA的量。 4、定糖法的定性测定原理 2、材料与试剂 1、实验材料 RNA粗制品 定磷法测定RNA含量 2、实验试剂 实验试剂配制中的注意事项参P-139。 3、实验步骤 实验中的注意事项及解说详见实验讲义P-140。 4、实验结果及处理 1 、无机磷标准曲线的制作 将所得的实验数据以磷含量为横坐标，光密度为纵坐标，画出标准曲