hESC和hiPSC体外定向诱导分化实验研究.pdfVIP

中文摘要 hESC和hiPSC体外定向诱导分化的实验研究 研究生王乐 导师叶放蕾教授 郑州大学第一附属医院耳鼻咽喉科 河南郑州450052 摘要 目的 stem cell，ESC)和人工诱导的人多能 研究体外诱导人胚胎干细胞(Embryonic stem 干细胞(Inducible cells，iPSC)分化为内耳毛细胞及神经细胞祖细 pluripotent 胞的方案，并探讨体外诱导分化各个阶段相关基因的表达情况及其意义。 材料和方法 性成纤维细胞生长因子)的培养基，使胚胎干细胞和人工诱导的人多能干细胞 先悬浮培养后贴壁培养，并对各个时间点的基因表达量进行实时定量PCR检测， 培养第13天进行免疫荧光检测。 结果 悬浮培养人胚胎干细胞和诱导的多能干细胞第三天可形成类胚体，随着悬 浮培养类胚体变得圆润饱满；贴壁培养并更换培养基，类胚体开始分化形成神 经花环。多能性基因nanog和oct4表达量随时I、日J的增长而降低；神经元祖细胞 特异性基因pax6和nestin表达量分别在第8天和第10天达到最高后开始减低； 中文摘要 到最高后开始减低。实验组胚胎干细胞分化的祖细胞特异性基因otx2，nestin， 与对照组相比有显著性差异(p0．05)：胚胎干细胞和诱导的多能干细胞来源 的祖细胞可特异性表达抗体PAX6，PAX2和NESTIN。 结论 l通过本实验确立了诱导人胚胎干细胞和诱导的多能干细胞有效分化为毛 细胞和神经细胞的祖细胞的实验方案。 13信号抑制剂A8301和细胞因子IGF可以有效的促进人胚胎干细胞和诱导的人 多能干细胞分化为毛细胞及神经细胞的祖细胞。 3在体外诱导人胚胎干细胞和诱导的人多能干细胞分化为毛细胞及神经细 胞的祖细胞的过程中特异性基因是相继表达的。 关键词：人胚胎干细胞，人工诱导的多能干细胞，定向分化，类胚体，神经花环 Abstract ofthe The studiescommitteddifferentiationof experimental hiPSC hESCand invitrO ByLewang Ye Supervisor：Prof．Fanglei of DepartmentOtorhinolaryngology TheFirstAffiliated HospitalofZhengzhouUniversity Henan 450052 Zhengzhou Abstract Objective： To an thathuman stem studyexperimentalprotocol Embryoniccell(hEsc)and humaninducible stem