沙门菌、志贺菌、副溶血性弧菌多重PCR检测方法的研究.pdfVIP

微 生物学杂志 2oo9年3月第29卷第2期 JouRNALoFMlcR0B10L0G Mar·2009Vol·29No2· lol 沙门菌、=，C．、贺茵、副溶血性弧菌多重 PCR检测方法的研究 肖 勇 ，吴家林 ，凌 霞 ，张敬平 ，倪陪华 ，沙 丹 (1．无锡市疾病预防控制中心 ，浙江 无锡 2HO23；2．1二海交通大学 ，上海 200025) 摘 要 建立快速检测沙 门菌、志贺茵和副溶血性弧茵的多重PCR方法”。 。根据沙 门茵 A基 因、志贺茵 p。H基因及副溶血性弧茵TDH基因设计特异性 PcR引物 ，被检样品经4h振 荡培养后金属浴裂解制备 DNA模板 ，使用全 自动毛细管 电泳核酸检测系统分析 PcR扩增产物。在 58O、423和 245bp处分别 出现预期 的特异性 DNA条带，且无非特异扩增条带出现。敏感性试验显示沙 门茵在模拟标本 中的检测灵敏度为 l0 cfu／mL、志贺菌为1O。cfu／mL、副溶血性弧茵为1O cfu／mL。该方法操作方便、分析时间短、特异性和灵敏度高， 可用于公共卫生突发事件食源性病原菌的快速检测 。 关键词 多重 PcR；振荡培养 ；毛细管电泳；食品检验 中图分类号 Q93—31 文献标识码 B 文章编号 1o05—7021(2O09)O2一OlO1一O5 M ultiplePCR DetectiOnM ethOdf0rS口 O e spp．， S Z spp．，and m ，‘p口，’ 口 o f XIA0 Y0ng’ WU Jia．1in ，LING Xia ，ZHANGJing．ping ，NIPei．hua ，SHA Dan ， (1．阢 f “n如 ．cen￡．，。rD ．c0 ．口ndPree￡．，讳 2l4023；2．5^口n ^口oog￡ 口． 口ng^o2OO025) Abstract In0rdert0establisharapiddetectionmeth0d0fmultiplePCR f0rS口Z，nDne 口spp．，S fZ。spp．，and 6rfDpn，乜^口8mo c“，threepairs0fspecificPcR prjmersweredesigned acc0rdingt0genes ZA inS口Z，0neZZ0 。pp．， 口H ins喀ezZ pp．，andTDHinW6r。p口rⅡ。e，n0f=c比．ThegenomieDNAtemplateofthetestedsamples werepreparedbyextractionwilhmeta1bathafIershakingculturef0r4hours，andthePCR—amplmedpr0ductswere then analyzedbyfull—aut0m8tjccapillayelectr。phoresis．Theresultsshowed thatthepredicted specificDNA amplifi— cationbandsweredem0nstratedatsequences0f58Obp，423bp，and245bp，andnonunspecificampli矗edbandsap— peared．AssayonsensitivityofthismultiplePCR withstimulated sample8were 1O卜 cfu／mlfrom S。Z肌one￡Zd spp．， 1O cfu／mLfrom ．S ez口spp．，andlO cfu／mL from 6r p口m ^Pmo ．Theref0re， h【ismethodwassimplem 。perate，takeshorttimetoana1yze，highspeci矗cityandsensitjvity，andwillbeusef_ulf0rrapiddetectionoff0od-b0rne pathogensinunexpected incjdent0fpublichealth． K