骨髓间充质干细胞移植对腺嘌呤致肾间质纤维化大鼠模型的影响的研究.pdfVIP

目 录 一、摘要 中文论著摘要………………………………………………………………1 英文论著摘要………………………………………………………………3 二、英文缩略语…………………………………………………………………5 三、论文…………………………………………………………………………6 前言…………………………………………………………………………6 日U舌…………………………………………………………………………D 材料与方法…………………………………………………………………7 结果…………………………………………………………………………12 讨论…………………………………………………………………………23 结论…………………………………………………………………………24 四、本研究创新性的自我评价…………………………………………………25 五、参考文献……………………………………………………………………26 六、附录…………………………………………………………………………28 综述…………………………………………………………………………28 在学期间科研成绩…………………………………………………………39 致谢…………………………………………………………………………40 个人简介……………………………………………………………………41 ·中文论著摘要· 骨髓间充质干细胞移植对腺嘌呤致肾间质纤维化大鼠 模型的影响 目 的 各种肾脏疾病进展到终末期肾衰竭的共同途径为肾间质纤维化。研究如何延 缓、阻止甚至逆转肾间质纤维化为当前研究的热点问题．骨髓间充质干细胞可分 化为肾组织的多种细胞并参与肾损伤后的修复和再生．骨髓MSCs移植在几种常 用的肾间质纤维化动物模型中得到应用，并取得不同的治疗效果。腺嘌呤致。肾间 质纤维化模型近年来广泛应用于药物研究领域，但CNKI及Pubmed检索未见有关 骨髓MSCs移植对于该模型大鼠作用的报道。 本实验通过体外分离、培养、纯化和扩增大鼠骨髓MSCs，用带有绿色荧光蛋 白基因的腺病毒(hd—GFP)进行转染，并建立腺嘌呤致大鼠肾间质纤维化模型， 将转染Ad—GFP的MSCs移植入大鼠体内，观察骨髓MSCs移植后在肾脏中的分布并 检测大鼠肾功能、尿蛋白定量，a—SMA表达量的变化探讨骨髓MSCs移植对腺嘌呤 所致肾间质纤维化大鼠模型的影响。 材料与方法 不同强度携带绿色荧光蛋白的重组腺病毒(Ad—GFP)转染MSCs，用流式细胞仪测 定转染效率，筛选出最佳转染强度(MOI)，并以最佳转染强度将HGF基因体外转 染MSCs。 选择3月龄Wistar大鼠25只，随机分为正常对照组及模型组，模型组给予 腺嘌呤lOOmg／Kg／d灌胃30天，各组随机取5只留尿取肾。停药3个月后，将剩 余模型组分为移植组与非移植组，移植组给予Ad-GFP转染的MSCs移植，对照组 注射等量的无血清培养基，于移植后30天留尿取肾，取双侧肾脏，制作石蜡切片， HE、PAS、Masson染色，免疫荧光双标记，免疫组化a—SMA。 结果 1．骨髓MSCs原代培养7—9天可以传代，传代后细胞增殖加快，4—5天可再次 传代；免疫组化结果显示骨髓MSCs中CD90阳性、CD34阴性。 2．转染强度MOI=400时，转染效率为54．1％ 3．成功以lOOmg／kg／d腺嘌呤灌胃制作大鼠肾间质纤维化模型。 4．免疫荧光结果显示：移植组肾间质区可见大量绿色荧光细胞，随机计数5 个视野内荧光双标记细胞占所有显示绿色荧光细胞的比例约为31．4％。 5．移植组肌酐尿素氮较非移植组显著升高，24小时尿蛋白定量增多，肾脏病 理评分多，a—SMA表达强于非移植组，而与正常对照组相比均有显著差异。 结论 在腺嘌呤致肾间质纤维化大鼠模型中，经鼠尾静脉注射Ad—GFP转染的MSCs 虽然可以靶向定位到‘肾脏并可以分化为肾小管上皮细胞，但并不能阻止肾间质纤 维化进程，甚至加重该模型大鼠肾间质纤维化及肾小球病理受