产肠毒素性大肠杆菌Sta-K99融合基因重组腺病毒载体的构建及表达.pdfVIP

摘要 Escherichia 产肠毒素性大肠杆菌(Enterotoxigeniccoli，ETEC)是全球性人和动物传染性腹 泻的重要病原体之一，给畜牧业造成巨大的经济损失，同时给人类公共卫生安全造成重要威胁。 本研究利用PCR幂II基因重组等技术，克隆了产肠毒素性大肠杆菌STa和K99基因，并将其融合构建 了穿梭质粒，将穿梭质粒和骨架质粒在293细胞内进行包装得到重组腺病毒。PCR鉴定结果表明， 成功构建了重组腺病毒载体Ad5STaK99，在此基础上，利用Western blot方法对重组腺病毒进行了 融合蛋白表达的检测及免疫原性研究，为研制预防由ETEC引起的新生动物腹泻重组腺病毒载体 疫苗奠定基础。主要实验结果如下： 1．根据设计的特异引物，利用PCR技术，成功克隆了STa基因和K99基因，核苷酸序列测 定结果有一个碱基突变，导致一个氨基酸的突变，分析表明，两氨基酸性质相同，蛋白质三级结 构预测一致，不影响蛋白的免疫原性。 穿梭质粒pAd5 STa-K99和骨架质粒经Pac1分别进行酶切后回