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实验五 植物胚的诱导培养（理论） ※ 胚胎培养 指使胚或具胚器官在离体无菌条件下发育成幼苗的技术。 广义胚胎培养： 胚的培养、胚乳培养、子房培养、胚珠培养、试管受精※ 胚胎培养的意义 ⊙ 克服杂种胚的败育，获得稀有杂种 ⊙ 获得单倍体和多倍体植株 ⊙ 打破种子休眠，促进胚萌发 ⊙ 快繁良种，缩短育种周期 ⊙ 克服种子生活力低下和自然不育性，提高发芽率 ⊙ 提高后代抗性，改良品质 ⊙ 种子活力的快速鉴定 ⊙ 种质资源的搜集与保存 ⊙ 研究胚胎发育的过程和控制机制 一、植物胚的培养 （一）离体胚的培养 指在无菌条件下将胚从胚珠或种子中分离出来，置于培养基上进行离体培养的方法。 植物胚结构 （二）离体胚培养的方法 1、成熟胚 将受精（传粉）后的果实或种子，用药剂表面消毒，然后在无菌条件下剖开种子，取出胚接种于培养基上，在人工控制条件下发育成一棵完整植株。 2、幼胚 条件：完全的人工合成培养基、高剥离技术、直接接种培养基上、不同于成熟胚 （三）离体胚培养的关键技术 1、植物材料的选择和胚龄对培养的影响 ★种胚易分离 如：十字花科和豆科 ★控制条件下培养的植物 如：荠菜 ★沿花序轴由上而下，胚龄增大 ★人工授粉手段 ★胚龄越大，培养越易成功 2、胚的剥离 因素：★植物种类 ★胚龄 ★种皮的硬度 3、胚的处理 即胚的显微手术试验。 揭示了种子萌发过程中胚各组分之间的互作及胚的各个组分的形态发生潜力。 4、选择适合的培养基 ★成熟胚：简单培养基 ★远缘杂种胚：基本培养基 + 有机物 + 生长调节剂 ★未成熟胚：营养要求复杂，条件苛刻 胚培养的成功与否，关键之一：是否提供给胚适合的营养需要。离体胚成长过程中对营养的要求是变化的。 一般幼胚培养均以MS为基本培养基，少数以MB（MS无机盐，B5有机物）为基本培养基，可加一定浓度的2，4-D和KT。 5、渗透压对胚培养的影响 ⊙渗透压调节依赖 糖 成熟胚在含2%蔗糖的培养基上生长良好、幼胚对糖要求高 原胚培养时蔗糖用量可达8% ~ 12% ⊙渗透压调节也可用无机盐 浓度一般为0.2% ~ 0.4%、超过0.8%，对胚有毒害 6、生长调节物及其他附加物 通常需要生长素和分裂素，可同时加入 搭配要合理 成熟胚和幼胚培养时，激素的使用不是必需的 附加物： 维生素类氨基酸类核酸及水解物植物激素 活性炭天然提取物 7、培养基酸碱度对胚培养的影响 丁香幼胚萌发率以pH为6.2最大，达87.5%，成苗率为88.55% pH过高过低，萌发率和成苗率都很低8、环境条件对胚培养的影响 A、光照：幼胚黑暗或弱光较好，轻微抑制作用 核桃：接种后于22±1℃的黑暗下培养易成功 龙眼：完全黑暗培养，可避免酚类的毒害 荠菜：以12h/d光照比黑暗条件好 B、温度条件：一般25 ~ 30 ℃之间生长良好 热带植物对温度要求高些 有休眠习性的植物，接种后先置于4 ℃下培养一段时间，再转入正常温度下培养较好 二、植物胚乳培养 （一）概况 取带胚乳细胞的种子表面消毒后，无菌条件下剥离胚乳组织，接种培养。 不同胚乳发育类型及发育时期直接影响外植体取材时期以及胚乳细胞产生愈伤组织频率。 胚乳培养的后代，常发生细胞染色体数目变化，形成多倍体、非整倍体等。 （二）胚乳培养的关键 A、胚乳发育时期的影响 发育早期胚乳：操作不便，诱导率低 游离核期或刚转入细胞期的核型胚乳：难得callus 旺盛生长期胚乳：易诱导产生callus ★ 旺盛期胚乳特征 §胚已分化完成 §胚乳已形成细胞组织 §充分生长，达到成熟大小 §外观为半透明的固体状 §富有弹性 一般情况下：接近成熟或完全成熟的胚乳callus诱导率很低，甚至无callus 木本植物，如：桑寄生科、檀香科植物，其成熟胚乳和诱导产生callus B、培养基和激素的影响 培养基：MS、B5、MT、White、LS等 水解酪蛋白、酵母提取物也很必要 激素：要求特殊 大麦胚乳只有在添加2，4-D的培养基上才能生长 猕猴桃胚乳培养中，玉米素最好 枣的胚乳培养中，激素似乎无特殊要求 C、其他因素的影响 蔗糖浓度：3% ~ 5% ；温度：25℃ ； pH值：如 玉米 6.1 ~ 7.0 ； 苹果 6.0 ~ 6.2等 （三）几种植物胚乳培养的方法 A、枸杞 B、葡萄 三、植物胚珠培养